健脾补肾、泻浊祛瘀法干预慢性肾衰病程的研究

项目名称：健脾补肾、泻浊祛瘀法干预慢性肾衰病程的研究

课题来源：山东省2008年科学技术发展计划资助课题（编号2008GG2N02002）。

参研人员：郭兆安 张爱真 徐炳侠 刁亚军 张学顺  房婧

完成年限：2009 年 1月－2011年12月

内容简介：慢性肾脏病（chronic kidney disease CKD）在全球发病率一直呈现上升趋势，巳成为全球最关注的公共卫生问题之一。2007年发表的由美国国家健康研究所支持的一项美国健康与营养调查（NHANES）1999-2004年结果分析表明在美国CKD是一个正在增多的疾病。在我国北京市18岁以上城、乡人群中CKD的患病率为13%。CKD若得不到有效控制会最终发展为慢性肾功能衰竭（Chronic  Renal Failure，CRF）。据统计，全球因慢性肾功能衰竭进行透析人数不断增加：1990年为42.6万，2000年为106.5万，预计2010年将达到200余万人。但占全球人口80%的发展中国家和欠发展国家，却占透析人数的10%，这些国家的大多数终末期肾衰患者得不到透析救治的机会。在中国，据北京、上海两个大城市的不完全调查，每年进入血透的新患者人数均在4000例左右。同时，尽管透析和移植能拯救病人的生命、提高生活素质，但不管透析或肾移植，病人及其家庭以至社会，都要承担巨额的医疗费用。在中国仍有不少尿毒症患者得不到及时的透析，能够接受肾移植的患者就更加少。特别是农村、西部地区的病人还得不到透析、移植治疗，而死于尿毒症。因此积极探讨CRF的非替代治疗，减轻病人痛苦，缓解高额治疗费用给家庭、社会带来的沉重负担，已成为广大医务工作者面临的艰巨任务。山东中医药大学附属医院肾内科郭兆安

慢性肾功能衰竭可由多种病证发展而来，病程冗长，病机错综复杂，既有正气的耗损，又有实邪蕴阻，属本虚标实，虚实夹杂之证。治疗上要分清标本虚实，正虚邪实的轻重进行辨证治疗。本课题组经过多年临床积累总结得出慢性肾衰主要病机为脾肾两虚、浊瘀阻滞，据此以健脾补肾、泻浊祛瘀为治则，拟定祛毒颗粒。本课题通过临床和实验研究，从分子生物学水平阐明了中医健脾补肾、泻浊祛瘀法治疗CRF的疗效和机理，证实健脾补肾、泻浊祛瘀法具有抗肾间质纤维化、抗肾小球硬化的作用，能干预慢性肾衰的长期（1-6年）病程，延缓慢性肾衰的进展，为本病的中医治疗提供了一种有效方法。本课题达到预期目的。

实验研究

1.祛毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的干预作用  目的：观察祛毒颗粒对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠肾间质纤维化的干预作用，并探讨其作用机理。方法：将90只雄性Wistar大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、尿毒清组（对照组）、祛毒颗粒低剂量组(低剂量组)、祛毒颗粒高剂量组（高剂量组），每组18只，除假手术组，其余各组用单侧输尿管梗阻法（UUO）建立肾间质纤维化动物模型，术前1天起各组给予相应浓度和剂量的药物，分别在术后第3d、7d、14d分批处死大鼠，检测大鼠尿N-已酰-β-氨基葡萄糖苷（NAG）酶、血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）变化，梗阻侧肾组织行HE染色和Masson染色，HE染色观察肾组织病理变化并半定量计算肾小管损伤指数（tubulointerstitial injury index, TII），Masson染色测定肾间质胶原面积，免疫组化法检测结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原（ColⅠ）、肝细胞生长因子(HGF)、骨形成蛋白(BMP)-7在肾组织的表达。结果：与模型组及对照组相比，祛毒颗粒能明显降低UUO大鼠术后14天的尿NAG酶、Scr、BUN（P＜0.05）；对梗阻侧肾组织HE染色进行TII评分发现，不同时间点，2个试验组大鼠肾小管损伤指数低于模型组和对照组（P＜0.05~0.01）；Masson染色测定肾间质胶原面积，2个实验组大鼠肾间质胶原面积少于模型组和对照组（P＜0.05~0.01）；免疫组化法染色发现，与模型组和对照组相比，2个试验组大鼠CTGF、ColⅠ在肾组织的表达下调（P＜0.05），HGF、BMP-7在肾脏组织的表达上调（P＜0.05）。结论：祛毒颗粒具有改善肾间质纤维化的作用，其机制可能与下调UUO大鼠致纤维化因子CTGF、ColⅠ在肾脏的表达，上调抗纤维化因子HGF、BMP-7在肾脏的表达有关。

2. 祛毒颗粒对5/6肾切除大鼠肾脏皮质MMP-2、TIMP-2、ECM及足细胞超微结构的影响

目的：观察祛毒颗粒对5/6肾切除大鼠肾皮质基质金属蛋白-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制物-2（Tissue inhibitor of metalloproteinase-2，TIMP-2） 蛋白表达、细胞外基质（extracellular matrix， ECM） 积聚和足细胞超微结构的影响。方法：将55只Wistar大鼠随机取10只为正常对照组，余用5/6肾切除法建立慢性肾功能衰竭（CRF）动物模型，将造模成功后的大鼠随机分为模型组、尿毒清颗粒组（简称对照组）、祛毒颗粒低剂量组（简称低剂量组）、祛毒颗粒高剂量组(简称高剂量组)，每组10只，分别给与相应浓度和剂量的药物，实验期间测定大鼠的尿蛋白、肾功能，治疗12周后观察其肾脏病理改变，PAS染色评价肾小球硬化程度，免疫组化法检测肾小球Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（FN）和MMP-2、 TIMP-2蛋白表达，电镜观察足细胞超微结构。结果：祛毒颗粒能明显减少5/6肾切除大鼠尿蛋白量（P <0.05），改善肾功能；减轻肾脏病理损害；PAS染色显示，祛毒颗粒治疗后肾小球阳性面积与肾小球总面积比值、肾小球硬化指数明显下降（P<0.01）；免疫组化检查显示祛毒颗粒能抑制了FN、ColⅣ在肾组织的表达（P<0.01），下调TIMP-2蛋白表达，增加MMP-2活性，减轻ECM积聚；电镜观察显示，祛毒颗粒能减少足细胞脱落，减轻足突融合，保护足细胞形态。结论：祛毒颗粒通过调整5/6肾切除大鼠肾皮质MMP-2、 TIMP-2的表达，促进ECM降解，减轻ECM集聚,保护足细胞，起到减轻肾小球硬化的作用。

二．临床研究

1. 祛毒颗粒治疗慢性肾功能衰竭的临床研究  目的：观察祛毒颗粒治疗慢性肾功能衰竭（Chronic  Renal Failure，CRF）的临床疗效。方法：将中医辨证符合脾肾两虚、浊瘀阻滞的CRF患者按数字表法随机分为试验组和对照组，试验组给予祛毒颗粒，对照组给予尿毒清颗粒，均为每次1袋，1日3次。观察两组治疗前后24h尿蛋白定量、N-已酰-β-氨基葡萄糖苷酶（N-acyl-β-glucosaminidase ，NAG）、血红蛋白（Hemoglobin ，Hb）、血浆白蛋白（Serum albumin ，Alb）、甲状旁腺激素（Parathyroid hormone ,PTH）、纤维蛋白原(fibrinogen,Fib)、血清肌酐（Serum creatinine，Scr）、尿素氮（BUN)、尿酸（UA）、β₂-微球蛋白(β₂- Microglobulin，β₂-MG)、视黄醇结合蛋白（Retinol-binding protein，RBP）及中医症状积分，计算CCr，每月观察记录1次，共观察3月。结果：剔除无效病例后，试验组122例，对照组121例。治疗后两组患者24h尿蛋白定量、NAG、PTH、Fib、Scr、BUN、UA、β₂-MG、RBP较治疗前下降（P<0.01），Hb、Alb、CCr较治疗前升高（P<0.01）；治疗后同期比较，试验组上述指标改善优于对照组（P<0.05）。祛毒颗粒对中医症状的改善亦优于对照组（P<0.05）。试验组临床总有效率优于对照组（90.16%vs66.94%），X²=24.3, P<0.01。结论：祛毒颗粒能有效治疗慢性肾功能衰竭, 具有改善肾功能、减少尿蛋白、升高血浆白蛋白、纠正甲状旁腺功能亢进及凝血、改善临床症状等作用。

2. 祛毒颗粒干预慢性肾功能衰竭病程的临床研究  目的：观察祛毒颗粒对慢性肾功能衰竭（Chronic  Renal Failure，CRF）病程的干预作用，并探讨其机制。方法：将符合CRF诊断标准的CRF患者按数字表法随机分为试验组和对照组，试验组给予祛毒颗粒，对照组给予尿毒清颗粒，均为每次1袋，1日3次。观察两组患者的血压、24h尿蛋白定量、血浆白蛋白（Serum albumin ，Alb）、血红蛋白（Hemoglobin ，Hb）、血清肌酐（Serum creatinine，Scr）、尿素氮（BUN)、尿酸（UA）每3月观察记录1次，每例患者观察12月以上。以血肌酐倒数（1/SCr）为纵坐标，以病程时间（月）为横坐标，观察各组斜率和回归系数（b）并比较其差异，分析血压、24小时尿蛋白定量、血浆白蛋白、血红蛋白的变化对病程的影响。结果：完整病例试验组77例，对照组75例，试验组观察时间长于对照组（42.8±18.5月vs 34.2±12.7月），P<0.01；48月试验组未到达观察终点35例，占45.45%，对照组24例，占32%，试验组未达到观察终点比率比对照组减少13.45%， P<0.01。根据血肌酐倒数(1／Scr)和时间绘制回归直线，试验组b值为-0.00258±0.00132，对照组b值为-0.00386±0.00167，试验组斜率明显小于对照组（P<0.01)。治疗后，试验组血压、24小时尿蛋白定量低于对照组（P<0.05），血浆白蛋白高于对照组（P<0.05）。结论：祛毒颗粒能延缓CRF病程，其机制可能与降低血压、减少尿蛋白排泄、升高血浆白蛋白等因素有关。

发表文章：

1.郭兆安 ，李敏 ，赵鑫，等. 祛毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的干预作用。中国中西医结合肾病杂志，2010；11（11）：965-969。

2.郭兆安，房婧，赵鑫，等.祛毒颗粒对5/6肾切除大鼠肾脏皮质MMP-2、TIMP-2、ECM及足细胞超微结构的影响。中国中西医结合肾病杂志，2011；12（7）：582-587。

3.郭兆安，张爱真，徐炳侠，等. 祛毒颗粒治疗慢性肾功能衰竭的多中心临床研究。中国中西医结合急救杂志，2011,18（4）：197-200。

课题水平：国际先进水平  鉴定证书：鲁科成鉴字[2011]第1406号

获奖级别：2012年山东中医药科学技术奖叁等奖，项目编号：Z2012-1-3-20-1。