鼻敏片对豚鼠变应性鼻炎鼻粘膜组胺的影响

变应性鼻炎是发生在鼻粘膜的变态反应性疾病，以鼻痒、喷嚏、鼻分泌亢进、鼻粘膜肿胀等为主要特点，是耳鼻咽喉科常见病、多发病，且近年发病率呈上升趋势。组胺是本病发 病中的重要介质，抗组胺药仍是治疗本病主要而有效的药物。本实验通过观察鼻敏片对豚鼠变应性鼻炎鼻粘膜组胺含量的影响，并与息斯敏对照，以揭示其疗效机制，为本病的治疗提供了广阔的前景。  湖南中医药大学第一附属医院耳鼻咽喉科李凡成

1  材料与方法

1.1  实验药物

1.1.1  鼻敏片 

主要由附子、炙黄芪、益智仁、麻黄、诃子、细辛、苦参、白术等10味药组成，由湖南中医学院附二院药剂科制备，1.5 g生药／片，成人3次／日，6片／次。实验给药前去糖衣，用生理盐水溶解。 

1.1.2  息斯敏 

主要含阿司咪唑，为H受体拮抗剂，具有抗过敏作用。由西安杨森制药有限公司生产，10mg／片，成人1次／日，1片／次。给药前用生理盐水溶解 。 

1.2  分组及造模方法 

采用国内外公认的以 TD为致敏原，对豚鼠行鼻内给药法建立的鼻超敏反应动物模型。健康豚鼠60只，雌雄各半，体重 389.03±31.08g，试验前每只豚鼠均行鼻分泌物涂片wright染色，以观察其分泌物中嗜酸性细胞分布情况，结果均为阴性。然后按体重、性别将豚鼠随机分为正常组、模型组、鼻敏片低、中、高剂量组、息斯敏组共6组，每组10只。除正常组单纯用橄榄油（10 μl每侧5μl）滴鼻外，其余每只豚鼠均用10%橄榄油溶液10μl滴 鼻( 每侧5μl )，每日1次，连续5天后必为隔日给药（维持致敏）至实验结束。鼻分泌物涂片嗜酸性细胞阳性及症状积分超过5天为造模成功 。 

1.3  给药方法  

每组均从造模开始后第11天进入处理过程，每天灌药1次，连续10天。除正常组和模型组每天灌服相应体积生理盐水外，其余各组每天灌服相应药物(1 ml／200g )，剂量按人鼠体表面积折算。鼻敏片低剂量组为临床等效剂量，低 、中、高剂量比例为1：2：4 。

1.4  观察指标及方法

1.4.1  鼻部症状观察  

从第1次滴药开始，定时观察鼻部症状如鼻痒、喷嚏、清涕等出现的时间及轻重，并按如下评分标准给予评分记录：鼻痒：轻度：1分，轻擦鼻几次；重度：2分，抓挠鼻面不止，到处擦磨。喷嚏：1～3个为1分；4～10个为2分 ；11个以上为3分。清涕：流到鼻前孔为1分，超过鼻前孔为 2分；流涕满面为3分。记录时以叠加法记总分，总分超过5分者为模型成功，观察时间：第10天、第20天、40天鼻腔滴药后30min内。 

1.4.2  鼻分泌物涂片检查  

根据Lorcn氏法改进。自制微型小棉棒，伸入鼻腔轻擦取下鼻甲表面3次制作涂片，均匀地涂于载玻片上，行wright染色，在光镜下寻找嗜酸性细胞。大量嗜酸性细胞为造模成功。检查时间：第1次鼻腔滴药后第10天。 

1.4.3  鼻甲粘膜组胺含量测定  

暴露鼻中隔及双侧鼻腔后，从基底部剪下上、中、下鼻甲，在冰上剥除软骨，准确称取100mg组织，置于-20ºC冰箱中保存。检测前解冻，每管加入0.5ml 5％高氯酸在冰上匀浆，15000 rpm离心10min，取上清，置于LC一6A高效液相色谱 仪中检测。流动相为40 mmoL／L柠檬酸缓冲液( pH=5.50) ，流速为 1.0 mL／min,衍生试剂流速为 0.4 m l／min,荧光检测器激发波长350mm，发射波长440 nm，组胺含量以 μg／mg为单位。 

2  结  果

2.1  鼻部症状观察  

致敏豚鼠从第1次滴药开始,鼻腔滴药后10min内均不同程度地出现了鼻痒和喷嚏症状,但无明显清涕。上述症状随着药次数增加而逐渐加重，并出现清涕。典型的鼻痒、喷嚏和清涕症状出现于开始滴药5?7天后。10天后造模全部成功。正常组偶有鼻痒或喷嚏，但无清涕，与文献报道基本符合。(见表1、表2 ) 

2.2  鼻分泌物涂片细胞学检查

 第1次滴药前检查所有动物均未发现嗜酸性细胞。于滴药后第10天检查发现，除正常组外，各组均见大量嗜酸性细胞，说明造模成功。 

2.3  鼻甲粘膜组胺含量测定 ( 见表 3 ) 

3 讨  论

组胺在变应性鼻炎发病的多个环节中起主导作用，是产生变应性鼻炎症状的主要炎性 介质，可激动鼻粘膜上分布的三叉神经末梢上的H₁受体,引起三叉神经的动作电位，产生鼻痒和喷嚏，同时可使微血管扩张、血管通透性增加、组织水肿、嗜酸性细胞增多及分泌活动亢进等。就用H₁受体拮抗剂虽可有效地阻断变应性鼻炎的临床症状，但因存在停药后易复发及不同程度的副作用而使应用受到限制。 

变应性鼻炎中医称为鼻鼽，认为多由肺、脾、肾三脏之气，阳虚，为风寒异气所犯而致。鼻敏片是我院徐绍勤教授治疗变应性鼻炎的经验方，临床效验显著，是在中医基本理论指导下，结合现代药理学研究成果进行组方的。以麻黄附子细辛汤、玉屏风散为基础方，加上摄津止涕之品化裁而成。其中麻黄、附子、细辛、黄芪、白术、防风、益智仁等被证明具有抗 过敏作用的。 

实验表明鼻敏片能使豚鼠鼻甲粘膜组胺含量明显降低(P<0.01)，说明鼻敏片可通过抑制组胺释放，阻断组胺信息作用于鼻粘膜，使炎性细胞浸润减少、减轻组织反应；减轻变态反应症状而起治疗作用。实验还表明鼻敏片及息斯敏均能有效地控制变应性鼻炎的发作，改善变应性鼻炎的症状，而鼻敏片作用稳定、疗效持久。因此，息斯敏的作用是暂时的，不能达到根治变应性鼻炎的目的，而鼻敏片具有整体调节的作用，药效时间长，无毒副作用，可望根治本病，为中医药治疗本病提供了广阔的前景。