盐酸戊乙奎醚联合氯解磷定治疗混配农药中毒的实验研究

毒理学杂志2008年12月第22卷6期

中图分类号：R99  文献标识码：A  文章编号：

盐酸戊乙奎醚联合氯解磷定治疗混配农药中毒的实验研究

林大伟^1，2，菅向东¹， 阮艳君¹，郭广冉¹， 宁琼^1，2，王玉彩^1，3， 张建平⁴山东大学齐鲁医院中毒与职业病科菅向东

（1．山东大学齐鲁医院中毒与职业病科，山东 济南，250012；2. 山东省济南医院职业病科，山东 济南，250013；3．山东省齐河县人民医院内科，山东，齐河 251100，4. 山东大学医学院，山东 济南，250012）

 [摘要] 目的 观察盐酸戊乙奎醚注射液（长托宁）联合氯解磷定治疗混配农药中毒的治疗效果。方法 选取成年健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、染毒非治疗组、6h治疗组、12h治疗组和24h治疗组，实验结束后留取动物血清冻存待检测。结果 染毒非治疗组大鼠病死率为100%，治疗组大鼠全部存活，差异非常显著（P<0.01）。染毒非治疗组大鼠血清BUN、Cr、ALT、AST、ALP、GLU较对照组明显升高（P<0.01）,而治疗组各时段大鼠血清BUN、Cr、ALT、AST、ALP、GLU明显低于染毒非治疗组（P<0.01）。染毒非治疗组与治疗组各时段大鼠血清TP、ALB、A/G较对照组明显降低（P<0.01）。染毒非治疗组大鼠血清CHE活力较对照组明显降低（P<0.01）。而治疗组各时段大鼠血清CHE活力明显高于染毒非治疗组（P<0.01）。治疗组各时段大鼠血清CHE活力明显低于对照组（P<0.01）。染毒非治疗组大鼠血清TNF-α水平较对照组明显升高（P<0.01）。而治疗组各时段大鼠血清TNF-α水平明显低于染毒非治疗组（P<0.01）。结论：长托宁联合氯解磷定治疗混配农药中毒初步显示具有较好的疗效。

[关键词]；盐酸戊乙奎醚；氯解磷定；混配农药；中毒；治疗

 

Empirical study on treatment of mixed agricultural chemicals poisoning by penehyclidine hydrochloride combined with pralidoxime chloride

LIN Dawei^1,2, JIAN Xiang-dong¹, RUAN Yanjun¹,GUO, Guangran¹, NING Qiong^1,2, WANG Yucai^1,3, ZHANG Jianping⁴

（1. Qilu Hospital of Shandong University Jinan Shandong,250012: 2. Jinan Hospital , Jinan Shandong, 250013; 3.Qihe Hospital of Shandong Province,Qihe,Shandong,251100. 4. Medical college of Shandong University, Jinan Shandong,250012）

[Abstract] Objective To observe the treatment effect of penehyclidine hydrochloride combined with pralidoxime chloride on mixed agricultural chemicals poisoning. Methods All 50 healthy adult Wistar rats were randomizedly assigned into normal control groups, paraquat group, 6h treatment group, 12h treatment group and 24h treatment group. Serum was obtained at the end of experiment. Serum BUN, Cr, ALT, AST, ALP, TP, ALB, GLB, A/G, GLU and CHE was detected by automatic biochemistry analyzer and serum TNF-α was detected by ELISA. Results The  paraquat group animal were died within six hours. None animal died in treatment group and control group. The serum BUN, Cr, ALT, AST, ALP, GLU of paraquat were higher than that of

 

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基金项目：山东省科技厅计划项目（B200357）

作者简介：林大伟，副主任医师，硕士研究生，研究方向：职业病和内科急危重症。

通讯作者：菅向东，内科学博士，硕士生导师，研究方向，中毒急危重症的临床和基础研究。E-mail:[e-mail]

control groups（P<0.01）. The serum BUN, Cr, ALT, AST, ALP, GLU of treatment groups was lower than that of control groups（P<0.01）。The serum CHE of paraquat groups was lower than that of control groups（P<0.01）。The serum CHE of treatment groups was higher than that of paraquat groups（P<0.01）。The serum CHE of treatment groups was lower than that of control groups（P<0.01）. The serum TNF-α of paraquat groups was higher than that of control groups（P<0.01）.The serum TNF-α of treatment groups was lower than that of paraquat groups（P<0.01）。Conclusion The treatment of penehyclidine hydrochloride combined with pralidoxime chloride is effective on mixed agricultural chemicals poisoning.

[Key words] Penehyclidine hydrochloride injection; pralidoxime chloride;Mixed agricultural chemicals; Poisoning; Treatment

 

盐酸戊乙奎醚注射液（长托宁），其化学名称为3-(2-环戊基-2羟基-2苯基-乙氧基)奎宁环烷盐酸盐，是军事医学科学院毒物药物研究所设计合成的新型抗胆碱能药物，其主要作用特点是对M受体作用的选择性，广泛用于麻醉前给药、对抗有机磷的毒性作用等^[1-4]。近年来有关盐酸戊乙奎醚基础研究和临床应用进展迅速，然而，有关盐酸戊乙奎醚治疗混配农药中毒的疗效研究却未见报道，本文就此进行了深入细致的研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物及材料 成年健康SPF级Wistar 大鼠50只，山东大学实验动物中心提供，证书号：SCXK20030004，雌雄各半，体重在240～260g。追击手农药主要成分：22%乳油，含200g/L毒死蜱，20g/L氯氰菊酯乳油，批号20050218Z1C1武汉科诺生物农药有限公司产品。长托宁：批号 070104 ，成都力思特制药股份有限公司提供。氯解磷定注射液：批号 060501 ，上海旭东海普药业有限公司生产。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒，美国R?D公司进口分装，上海森雄科技实业有限公司提供。

1.2 动物处理：将上述大鼠随机分为正常对照组、染毒组、6h染毒治疗组 、12h染毒治疗组和24h染毒治疗组5组，每组10只大鼠。染毒组给予相应剂量的追击手农药溶液1 ml灌胃，对照组同时给予1 ml蒸馏水灌胃，治疗组于染毒后半小时开始给予盐酸戊乙奎醚注射液联合氯解磷定治疗。染毒组观察动物自然死亡，治疗组分别于染毒后6h、12h、24h 3个时间段处死动物，对照组于灌胃24小时后处死动物。观察并记录各组动物表现。

1.2.1混配农药给药方法 按毒死蜱160mg/kg计算，取原液用生理盐水稀释至1ml灌胃。1.2.2 长托宁使用方法 染毒半小时后每只大鼠给予长托宁0.1mg/kg 肌肉注射，1h后重复1次，2h注射1次，其后改为q6h等量给药。

1.2.3氯解磷定使用方法 染毒半小时后每只大鼠给予氯解磷定20mg/kg肌肉注射，1h后重复1次，2h注射1次，然后改为q12h等量给药。

1.3 标本采集及检测

各组动物均于观察结束后麻醉动物，采用下腔静脉穿刺取血约5 ml，取血后处死动物，血液静置20 min，离心后取血清，-70℃冻存，待检测。死亡动物于呼吸停止前采血。各生化指标采用自动生化分析仪测定。TNF-α测定参照有关试剂盒说明步骤进行。

1.4 统计学处理：用SPSS 13．0软件对数据进行方差分析和χ²检验。

2. 结  果

2.1 实验动物观察

结果如表1所示。染毒组大鼠于染毒后出现烦躁、易激惹、少动、萎靡、厌食、多汗、毛蓬松、呼吸急促、肢体麻痹等表现，染毒非治疗组大鼠均于6h内死亡，治疗组6h、12h、24h时间段均无动物死亡。治疗组和对照组与染毒非治疗组比较，差异非常显著（P ＜0.01）。

 

表1 实验动物死亡情况观察

组别	n	死亡数                    病死率（%）
对照组 6h治疗组 12h治疗组 24h治疗组 染毒非治疗组	10 10 10 10 10	0                           0                  0                           0                  0                           0                  0                           0                10                         100

治疗组和对照组与染毒非治疗组比较，P ＜0.01。

 

2.2 实验动物生化指标的变化

结果如表2、3所示。染毒非治疗组大鼠血清BUN、Cr、ALT、AST、ALP、GLU较对照组明显升高，差异非常显著（P<0.01）,而治疗组各时段大鼠血清BUN、Cr、ALT、AST、ALP、GLU明显低于染毒非治疗组，差异非常显著（P<0.01）。染毒非治疗组与治疗组各时段大鼠血清TP、ALB、A/G较对照组明显降低，差异非常显著（P<0.01）。染毒非治疗组与治疗组各时段大鼠血清TP、ALB、A/G比较差异无显著意义（P>0.05）。治疗组各时段大鼠血清BUN、Cr、ALT、AST、ALP、GLU、TP、ALB、GLB比较差异无统计学意义（P>0.05）。各实验组GLB比较差异无统计学意义（P>0.05）。

 

表2染毒后不同组别各时段大鼠血清BUN、Cr、ALT、AST、ALP指标变化（ ）

组别	n	BUN（mmol/L）  Cr(μmol/L)    ALT(U/L)     AST(U/L)        ALP(U/L)
对照组 6h治疗组 12h治疗组 24h治疗组 染毒非治疗组	10 10 10 10 10	5.53±0.71   61.70±6.70    36.80±10.29  45.70±13.99    42.10±8.84 7.08±0.64ab 75.80±6.90ab  59.20±11.64ab 76.70±37.38ab 62.70±9.41ab 6.79±0.80ab 79.40±7.09ab  61.40±12.89ab 78.90±28.45ab 70.70±11.92ab 6.61±0.74ab 75.90±6.63ab  56.40±9.96ab  71.90±21.85ab 64.20±10.02ab 9.97±0.69a  96.30±6.67a   99.10±14.78a 108.70±27.01a 116.30±15.43a

染毒非治疗组、治疗组与对照组比较，a P＜0.01；治疗组与染毒非治疗组比较b P＜0.01.

 

表3 染毒后不同组别各时段大鼠血清TP、ALB、GLB、A/G、GLU的变化（ ）

组别	n	TP(g/L)  ALB(g/L)      GLB(g/L)        A/G       GLU
对照组 6h治疗组 12h治疗组 24h治疗组 染毒非治疗组	10 10 10 10 10	75.26±6.54   32.77±2.80  43.42±5.75  0.77±0.13  4.39±1.59 66.18±5.55a  16.18±1.76a  42.00±7.70 0.36±0.06a  6.91±1.65ab 63.77±6.12a  16.84±2.04a  46.93±6.32  0.35±0.08a  6.72±1.20ab 65.83±5.58a  15.58±1.27a  44.25±7.95  0.32±0.07a  6.67±1.14ab 65.78±6.02a  16.71±1.77a  49.07±6.79 0.33±0.05a  9.98±1.42ab

染毒非治疗组、治疗组与对照组比较，a P＜0.01；治疗组与染毒非治疗组比较b P＜0.01。

 

2.3 实验动物血清胆碱酯酶活力变化

结果如表4所示。染毒非治疗组大鼠血清CHE活力较对照组明显降低，差异非常显著（P<0.01）。而治疗组各时段大鼠血清CHE活力明显高于染毒非治疗组，差异非常显著（P<0.01）。同时我们也发现治疗组各时段大鼠血清CHE活力明显低于对照组，差异也非常显著（P<0.01）。治疗组各时段大鼠血清CHE比较差异无统计学意义（P>0.05）。但是随着治疗时间的延长，CHE活力有逐渐恢复的趋势。

 

表4 染毒后不同组别各时段大鼠血清CHE的变化（ ）

组别	n	CHE(U/L)
对照组 6h治疗组 12h治疗组 24h治疗组 染毒非治疗组	10 10 10 10 10	342.17±24.03 282.78±34.42ab 292.56±37.33ab 311.89±27.15ab 117.56±33.89a

染毒非治疗组、治疗组与对照组比较，a P＜0.01；治疗组与染毒非治疗组比较b P＜0.01。

 

2.4 实验动物血清细胞因子TNF-α变化

结果如表5所示，染毒非治疗组大鼠血清TNF-α水平较对照组明显升高，差异非常显著（P<0.01）。而治疗组各时段大鼠血清TNF-α水平明显低于染毒非治疗组，差异非常显著（P<0.01）。治疗组各时段大鼠血清TNF-α水平与对照组比较，无显著性差异（P>0.05）。治疗组各时段大鼠血清TNF-α水平之间比较，无显著性差异（P>0.05）。

 

表5 染毒后不同组别各时段大鼠血清TNF-α的变化（ ）

组别	n	TNF-α(μg/ml)
对照组 6h治疗组 12h治疗组 24h治疗组 染毒非治疗组	10 10 10 10 10	0.218±0.027a 0.223±0.023a 0.224±0.021a 0.221±0.019a 0.253±0.023

对照组、治疗组与染毒非治疗组比较，a P＜0.01

 

3. 讨  论

长托宁作为新型抗胆碱能药物，其主要作用特点是对M受体作用的选择性，近年来研究进展迅速。胆碱能受体（ChR）分为毒蕈碱型胆碱能受体（MChR）和烟碱型胆碱能受体（NChR）, MChR又分为M₁、M₂、M₃亚型，而NChR分为N₁、N₂两个亚型。胆碱能受体各亚型在体内分布差异较大，M₁主要分布在支气管、胃肠平滑肌以及中枢突触后膜，M₂主要分布在心脏、中枢和外周的突触前膜以及膀胱、子宫平滑肌等也有分布，M₃只分布于内脏平滑肌。而N₁主要分布于神经节和中枢，N₂型主要分布于运动终板。目前临床上常用的抗胆碱能药物主要是阿托品和东莨菪碱，但是二者对MChR各亚型无明显选择性，因此在产生治疗作用的同时常常为产生一些不良反应。长托宁选择性作用于M₁、M₃和N₁、N₂亚型受体，对于M₂亚型无明显作用，能够通过血脑屏障进入脑内，作用于中枢神经系统。治疗剂量的长托宁能够较好地拮抗有机磷毒物中毒引起的中枢中毒症状和外周的毒蕈碱样中毒症状，但是由于对M₂受体无明显作用，因而无心率增加的不良反应，显示出广阔的应用前景，对临床治疗的发展具有重要意义，它起效时间和达峰时间短、消除半衰期延长，对中枢和外周M受体（除M₂受体）和N受体作用强，无阿托品引起的心率增快和心肌耗氧量增加等不良反应。对于改善毒蕈碱样症状和烟碱样症状具有较好的疗效^[5-8]。

追击手农药主要成分为含200g/升毒死蜱和20g/升氯氰菊酯乳油。毒死蜱是美国陶氏益农公司开发的一种广谱性杀虫剂，化学名称为O,O-二乙基-O（3，5，6-三氯-2-吡啶基）硫代磷酸酯；原药为白色或灰白色颗粒状晶体（或块状固体），目前毒死蜱是全世界生产和销售最大的杀虫剂品种之一，也是世界卫生组织许可的有机磷品种，现已经在中国、美国、澳大利亚、日本等14个国家登记和注册，它属中等毒性有机磷杀虫剂。氯氰菊酯是一种高效、广谱性拟除虫菊酯类杀虫剂，在我国使用广泛。追击手为毒死蜱与氯氰菊酯混配制剂，二者协同作用，具有药效快，击倒力强等特点，作用位点是乙酰胆碱酯酶和昆虫神经系统的钠离子通道，可导致昆虫神经失调而死亡。

2006年4月我国农业部、发改委、工商总局、质检总局联合发文（第632号）强调国内全面禁止生产、销售、使用五个高毒有机磷品种，即甲胺磷、乙基对硫磷、甲基对硫磷、久效磷和磷铵，今后高剧毒有机磷农药中毒将逐渐减少并退出我国农药市场。同时，国家有关部门加快了替代品种开发的力度，作为国家发改委推荐的高效、低毒、低残留的有机磷品种之一的毒死蜱，与氟虫腈、吡虫啉、阿维菌素等被农技部门推广。

上世纪90年代以来 ,为克服害虫抗药性,提高杀虫药效,混配农药逐渐占据我国农药市场,这也是我国当前和今后十年农药发展的主要趋势，而混配农药中毒的病例随之大量增多。随着农药混剂的大量生产和广泛应用，使我国农药中毒病例不断上升，混配农药的中毒问题日益突出^[8-11]。绝大多数混剂对哺乳动物的急性毒性呈增毒效应或协同作用，已证明要获得高效低毒的农药混剂须在混剂中选择高效低毒单剂，并以其高比例发挥主导作用。

长托宁治疗混配农药中毒国内外尚未见报道，我们的研究结果表明，长托宁治疗毒死蜱和氯氰菊酯混配农药中毒具有较好的疗效，可明显降低中毒的病死率，保护肝脏、肾脏等重要脏器的功能，胆碱酯酶恢复较快，因此具有较好的治疗作用。

有研究报道，AOPP血浆中TNF-α和NO水平均呈正相关，病情越重，TNF-α和NO浓度越高,TNF-α参与AOPP的病理过程^[12-15]。在本次研究中我们观察到，给予长托宁联合氯磷定治疗可以明显降低中毒大鼠血清TNF-α的水平，减轻中毒所致的脏器损害。

总之，本研究提示，长托宁联合氯磷定治疗急性混配农药中毒可能具有较好的疗效，为进一步临床应用提供了理论依据。

 

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