抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠血浆血管紧张素Ⅱ等的影响

魏景梅，王振涛，柴松波，李伯海

（河南省中医院心血管病研究室  河南郑州 450011）

(The cardiovascular diseases laboratory in traditional Chinese medicine hospital of Henan Province,Zhengzhou ,Henan 450011)河南省中医院心血管内科王振涛

【摘要】 目的：探讨抗纤益心方抑制扩张型心肌病（DCM）大鼠血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮的机制。方法：采用自主饮用呋喃唑酮水溶液建立DCM大鼠模型，抗纤益心方干预8周，用放射免疫法检测血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮含量。结果：模型组大鼠血浆中血管紧张素Ⅱ和醛固酮明显高于正常组（P<0.05）；与模型组比较，所有给药组（小剂量组除外）血浆中血管紧张素Ⅱ和醛固酮明显下降（P<0.05）；大剂量组与卡托普利组相比无显著差异（P>0.05），与中西药联用组比较有统计学意义（P<0.05），与小剂量组比较有显著差异（P<0.05）。结论：抗纤益心方能够干预扩张型心肌病大鼠左室重构，其作用可能与抑制血浆中血管紧张素Ⅱ及醛固酮的水平有关。

【关键词】抗纤益心方；扩张型心肌病；心室重构；血管紧张素Ⅱ；醛固酮；

【Abstract】Objective:To expound the mechanism of Kangxianyixin prescription on prevention on Angiotensin Ⅱ and  aldosterone expression in rats with Dilated Cardiomyopathy. Methods: Furazolidone was rised to establish Dilated Cardiomyopathy in wistar rats，which were treated 8 weeks with Kangxianyixin prescription, To measure Angiotensin Ⅱ andaldosterone expression in cardiac myocytes with radioImmunoassay technique. Results: There is higher expression in the model group compared with the normal group. There are significant difference between the model group and the other groups(except the low dosage group), There is no difference between the high dosage group compared with the captopril group. There is meaning in the low group compared with the captopril group.Conclusion: Kangxianyixin Prescription can influence the left ventricular remodeling in rats with dilated cardiomyopathy(DCM). The mechanism is associated to lowering the levels of  Aldosterone and Angiotensin Ⅱexpression.

【key words】Kangxianyixin Prescription；Dilated Cardiomyopathy；ventricular remodeling；Angiotensin Ⅱ；Aldosterone

 

扩张型心肌病（Dilated Cardiomyopathy，DCM）是一种以左心室和（或）右心室心腔扩大、心肌收缩功能障碍为主要特征的心肌疾病。也是除冠心病和高血压以外导致心力衰竭的主要病因之一。其临床常表现为进行性心力衰竭、心律失常、血栓栓塞甚或猝死，可见于病程中任何阶段，至今尚无特异性治疗方法，预后极差，据统计，其5年生存率不及50%^[1,2]。尽管近年来心血管病诊疗技术取得不少进展，但DCM患者的预后仍不容乐观。中医药在治疗DCM方面正进行着许多有益的探索。根据扩张型心肌病发病过程中多有气虚血瘀的病理特点，本文选用具有益气、活血、利水作用，且已知对DCM有确切临床疗效的方剂抗纤益心方治疗，从而探讨其抑制DCM心室重构的作用机制，为临床运用提供可靠依据。

1 材料与方法

1.1材 料

动物：Wistar大白鼠100只，雄性，体重(61.9±7.0)g，由河南省实验动物中心提供。实验室室温（20±3）℃，分笼喂养。

药物与试剂：抗纤益心方干浸膏(党参，黄芪，云苓，白术，丹参，川芎，红花，赤芍，泽兰，益母草)：由河南省中医院制剂室提供，每克浸膏相当于生药4克；呋喃唑酮：福建省三明天泰制药有限公司，30mg/片，批号：20050204；卡托普利：常州制药厂提供, 25mg/片，批号：200602242；血浆血管紧张素Ⅱ放免试剂盒：北京北方生物技术研究所；醛固酮放免试剂盒：北京北方生物技术研究所。

仪器： LNG-TB₃方式快速离心浓缩干燥机，太仓市科学实验仪器厂；Modular Analytics E170型全自动电化学发光分析仪，德国Roche公司产品。

1.2方 法

1.2.1分组与模型制备

参照文献方法^[3]，将100只Wistar健康雄性大白鼠，采用随机方法按5:1先分为造模组和正常组。造模组自主服用呋喃唑酮水溶液(按1Kg水加700mg呋喃唑酮配置)，每日更换一次。造模时间为8周。8周后再将存活的造模组大鼠随机分为五组，分别为中西药联用组、模型组、抗纤益心方治疗大剂量组、抗纤益心方治疗小剂量组、卡托普利对照组，每组14只。

1.2.2给药方法

正常组动物常规饲养，不进行药物干预；模型组每日管饲与治疗组同等容积的生理盐水；卡托普利对照组每日管饲卡托普利10.125mg/Kg?d；抗纤益心方治疗大剂量组每日管饲抗纤益心方18.8g/kg?d；抗纤益心方治疗小剂量组每日管饲抗纤益心方4.7g/kg?d；中西药联用组每日管饲中药大剂量和卡托普利。各治疗组均于自主服用呋喃唑酮水溶液8周即开始药物干预，抗纤益心方大、小剂量和对照药卡托普利均用生理盐水稀释，在保证药物剂量的前提下，调整浓度使每组给药容积均为1ml/100g/d，管饲给药。管饲的毫升数每组一致，同时模型组、卡托普利对照组、抗纤益心方治疗大剂量组、抗纤益心方治疗小剂量组、中西药联用组继续自主服用呋喃唑酮水溶液以保证致病因素的持续存在，16周后处死动物，进行各指标的观察。

1.2.3标本采集

动物麻醉后，沿腹部正中线打开腹腔，由下向上用5ml注射器针头斜刺入下腔静脉，抽取4ml静脉血，平均分装于两支试管中。其中一支试管加入0.30M EDTA,0.32M二巯基丙醇和0.34M 8－羟基亏啉硫酸盐（按取血1ml时，三种试剂加入量分别为10µl、5µl、10µl），试管振荡混匀后放于4℃冰箱中1－2小时，取出后2500转/分，4℃低温离心7分钟，分离血浆，将血浆密封后放入低温冰箱保存（－15℃以下），以备检测血浆血管紧张素Ⅱ；另一支试管加入肝素抗凝（按1mg肝素可抗凝5－10ml血加入），试管振荡混匀后分离血浆，将样本密封后放于－20℃以下冰箱中保存，以备检测血浆醛固酮。

1.2.4标本测定

将盛有以备检测血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮的试管送河南省中医院放免实验室检测，所有的操作严格按说明书进行；用四参数数据处理软件分析后得出检测结果。

1.2.5统计学方法

数值用均数±标准差（ ）表示，SPSS 13.0软件计算，结果之间的比较用单因素方差分析。

2 结果

放免法检测大鼠血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮

各组大鼠随机选取6只，用放免法检测大鼠血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮，比较各组大鼠血浆中血管紧张素Ⅱ和醛固酮差异情况。

模型组大鼠血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮较正常组、中西药联用组、中药大剂量组、中药小剂量组及卡托普利组相比明显升高（P<0.05）；各治疗组中中西药联用组效果最好，与正常组比较无统计学意义；大剂量组与模型组比较对其改善作用明显（P<0.05），与卡托普利组作用相似（P>0.05），与小剂量组比较有统计学意义（P<0.05）。见表1。

 

表1  放免法检测各组大鼠血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮含量（ ）

组  别	N	AngⅡ（pg/ml）	醛固酮（ng/ml）
正 常 组	6	69.47±7.79	0.34±0.11
模 型 组	6	159.94±12.03△	1.23±0.09△
卡托普利组	6	87.90±6.02 #△	0.74±0.42#△
大剂量组	6	85.23±5.18#△	0.69±0.06#△
小剂量组	6	129.14±2.29#△	1.01±0.53#△
中西药联用组	6	74.44±4.07#	0.40±0.08#

注：经单因素方差分析，与正常组比较，^△P＜0.05；与模型组比较，?P＜0.05。

3讨 论

一般认为，DCM有症状阶段属中医“惊悸、怔忡”、“胸痹”、“心痛”、“喘证”、“水肿”等病范畴，其发生是内外因共同作用的结果，形成本虚标实之证，早期气虚为本，瘀血为标；晚期心肾阳气虚衰，导致诸脏腑功能失调。其中气虚阳虚为本，瘀血、痰浊、水湿为标。而气虚血瘀是本病病机关键之所在，存在于病变发展过程中的各个环节，故益气活血法应贯穿于本病治疗的始终。

目前认为，心肌重构贯穿于DCM心衰病变过程的始终，DCM的治疗已转入干预神经内分泌因子方面，其中以对肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）的研究最为深入而且最受关注^{[4, 5]}。RAAS参与心肌重塑的主要原因可能是血管紧张素Ⅱ和醛固酮可刺激心肌细胞的胶原合成^[6,7]，并且这种致心肌纤维化的作用是独立于血流动力学的改变而存在的^[8]。抗纤益心方是笔者在临床上应用于治疗DCM、各种原因所致的心力衰竭等病症属气虚血瘀证的一个经验方。在改善症状，延缓和逆转心室重构方面起到了积极作用，为一临床疗效肯定的方剂。

我们的研究结果显示，模型组大鼠血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮较正常组、中西药联用组、中药大剂量组、中药小剂量组及卡托普利组相比明显升高（P<0.05）；各治疗组中中西药联用组效果最好，与正常组比较无统计学意义；大剂量组与模型组比较对其改善作用明显（P<0.05），与卡托普利组作用相似（P>0.05），与小剂量组比较有意义（P<0.05）；卡托普利组与大剂量组比较无差异（P>0.05），与模型组和小剂量组比较有意义（P<0.05）。六组大鼠按血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮检测结果排列顺序为模型组＞小剂量组＞卡托普利组＞大剂量组＞中西药联用组＞正常组。由此可见抗纤益心方和卡托普利均能有效抑制扩张型心肌病大鼠血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮的病理性升高，从而抑制左室重构。

 

参考文献

[1]Richardson P, McKenna W, Bristow W, etal. Report of the 1995 World Health Organization/International Society and Federation of Cardiology Task Force on the definition and classification of cardiomyopathies[J]. Circulation, 1996, 93: 841-842.

[2]马文珠,张寄南.心肌疾病[M].南京:江苏科学技术出版社,2000.64-69.

[3]黄荣杰,刘唐威,伍伟锋等.呋喃唑酮制备大鼠扩张型心肌病模型[J].中国病理生理杂志,2003,23(10):2147-2150.

[4]Weber KT and Brilla CG.  Pathological hypertrophy and cardiac interstitium: fibrosis andrenin-angiotensin-aldosteronesystem[J].Circulation,1991,83:1894-1865.                                                    [5]Brilla CG，Reams GP and Maisch B, et al．Renin-angiotensin system and myocardial fibrosis in hypertension: Regulation of the myocardial collagen matrix[J]. Eur Heart J,l993,l4(Supp15):57-61.                                                                             

[6]Suny,Weber KT.cell Expressing AngiongiotensinⅡ Inreceptors in Fibrous tissue of ratheart[J].Cardiovascres,1996,31(4):518-525.                            

[7]Eghbali-Webb M. Cardiac fibroblasts[M]. In: Eghbali-Webb Med．Molecular Biology of Collagen Matrix in the Heart．Georgetown,TX. R.G. Landes Co. l995，23-40．

[8]吴景程.醛固酮在心血管疾病中的作用[J].国外医学内科学分册,2006,33(8) 326-328.