抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

(The cardiovascular diseases laboratory in traditional Chinese medicine hospital of Henan Province,Zhengzhou ,Henan 450011)

【摘要】 目的：探讨抗纤益心方抑制扩张型心肌病（DCM）大鼠心室重构的机制。方法：采用自主饮用呋喃唑酮水溶液建立DCM大鼠模型，抗纤益心方干预8周，处死动物。用逆转录－聚合酶链反应法（RT-PCR）检测心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。结果：模型组心肌间质内Ⅰ、Ⅲ型胶原大量增生，与正常组比较有显著差异性（P<0.05）；中西药联用组、大剂量组心肌内Ⅰ、Ⅲ型胶原较模型组明显减少（P<0.05）；大剂量组与卡托普利组比较无差别（P>0.05），与小剂量组比较有统计学意义（P<0.05）。结论：DCM大鼠心肌呈明显纤维化，与Ⅰ、Ⅲ型胶原在心肌组织内较高的表达存在密切关系。抗纤益心方能够抑制心肌间质Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达，从而起到抑制心室重构的作用。河南省中医院心血管内科王振涛

【关键词】抗纤益心方；扩张型心肌病；心室重构；Ⅰ、Ⅲ型胶原；逆转录－聚合酶链反应

【Abstract】Objective:To expound the mechanism of Kangxianyixin prescription on prevention on cardiac muscle remodeling after Dilated Cardiomyopathy. Methods: Furazolidone was rised to establish Dilated Cardiomyopathy in wistar rats，which were treated 8 weeks with Kangxianyixin prescription, To measure tapeⅠand type Ⅲ collagen gene expression in cardiac myocytes with RT-PCR method. Results: There is higher expression in the model group compared with the normal group. There are significant difference between the model group and the other groups(except the low dosage group), There is no difference between the high dosage group compared with the captopril group. There is meaning in the low group compared with the captopril group.Conclusion: Kangxianyixin prescription can mitigate signs and symptoms,low down the pathologic damage. All these functions may be related to lowering the levels of neuroendocrine indexes and resisting tapeⅠand type Ⅲ collagen gene expression.

【key words】Kangxianyixin Prescription；Dilated Cardiomyopathy； ventricular remodeling； tapeⅠand type Ⅲ collagen；Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction.

 

扩张型心肌病[Dilated Cardiomyopathy，DCM]是一种以左心室和（或）右心室心腔扩大、心肌收缩功能障碍为主要特征的心肌疾病。也是除冠心病和高血压以外导致心力衰竭的主要病因之一。其临床常表现为进行性心力衰竭、心律失常、血栓栓塞甚或猝死，可见于病程中任何阶段，至今尚无特异性治疗方法，预后极差，据统计，其5年生存率不及50％^[1-2]。尽管近年来心血管病诊疗技术取得不少进展，但DCM患者的预后仍不容乐观。我们根据扩张型心肌病发病过程中多有气虚血瘀的病理特点，自拟具有益气、活血、利水作用的抗纤益心方治疗扩张型心肌病，在临床上获得了好的疗效。本研究采用动物实验方法观察其对扩张型心肌病大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响，从而探讨其抑制DCM心室重构的作用机制，为临床运用提供可靠依据。

1 材料与方法

1.1材 料

动物：Wistar大白鼠100只，雄性，体重(61.9±7.0)g，由河南省实验动物中心提供（动物合格证号：510116）。

药物与试剂：抗纤益心方干浸膏(党参，黄芪，云苓，白术，丹参，川芎，红花，赤芍，泽兰，益母草)：由河南省中医院制剂室提供，每克浸膏相当于生药4克；呋喃唑酮：福建省三明天泰制药有限公司，30mg/片，批号：20050204；卡托普利：常州制药厂提供, 25mg/片，批号：200602242；RNAex Reagent system：                     北京天为时代科技有限公司；Access RT-PCR System：美国Promage公司；Trizol Reagent：北京博大泰克生物基因技术有限公司。Ⅰ型胶原，Ⅲ型胶原，β-action引物由北京百泰克生物科技有限公司合成（Ⅰ型胶原：上游5´-TGA ACC CGG CAA ACA AGG TCC TTC T-3´，下游5´-GCC TCT GTC ACC TTG TTC GCC TGT CTC ACC-3´，扩增产物大小为379bp；Ⅲ型胶原：上游5´-GTG GTC CTC CAG GAG AAA ATG GAA A-3´，下游 5´-GCA CCC GCA CCG CCT GGC TCA C-3´，扩增产物大小为313bp；β-action：上游5´-CAT GGA TGA CGA TAT CGC TGC GCT C-3´，下游 5´-CCG GCC AGC CAG GTC CAG ACG C-3´，扩增产物大小为550bp）。

仪器：JY-1001型电子天平，上海民桥电子仪器厂；PC708型梯度PCR仪，                 日本Program Temp Control System；LNG-TB₃方式快速离心浓缩干燥机，太仓市科学实验仪器厂；DY?A 电泳仪，上海康达电子仪器厂；凝胶图象及显微镜摄像系统，美国Alpha Innotech Corporation；Toollab vL.11图象采集系统，         德国leica公司。

1.2方 法

1.2.1分组与模型制备

参照文献方法[3]，将100只Wistar健康雄性大白鼠，采用随机方法按5:1先分为造模组和正常组。造模组自主服用呋喃唑酮水溶液(按1Kg水加700mg呋喃唑酮配置)，每日更换一次。造模时间为8周。8周后再将存活的造模组大鼠随机分为五组，分别为中西药联用组、模型组、抗纤益心方治疗大剂量组、抗纤益心方治疗小剂量组、卡托普利对照组，每组14只。

1.2.2给药方法

正常组动物常规饲养，不进行药物干预；模型组每日管饲与治疗组同等容积的生理盐水；卡托普利对照组每日管饲卡托普利10.125mg/Kg?d；抗纤益心方治疗大剂量组每日管饲抗纤益心方18.8g/kg?d；抗纤益心方治疗小剂量组每日管饲抗纤益心方4.7g/kg?d；中西药联用组每日管饲中药大剂量和卡托普利。各治疗组均于自主服用呋喃唑酮水溶液8周即开始药物干预，抗纤益心方大、小剂量和对照药卡托普利均用生理盐水稀释，在保证药物剂量的前提下，调整浓度使每组给药容积均为1ml/100g/d，管饲给药。管饲的毫升数每组一致，同时模型组、卡托普利对照组、抗纤益心方治疗大剂量组、抗纤益心方治疗小剂量组、中西药联用组继续自主服用呋喃唑酮水溶液以保证致病因素的持续存在，16周后处死动物，进行各指标的观察。

1.2.3标本采集

动物麻醉后，迅速打开胸腔，取出心脏，滤纸吸干水份，全心称重。剪去左、右心房及右心室称左室重量。然后从心尖处沿冠状面切取心肌组织，称重为200mg左右，立即放入液氮中，后转入-70℃冰箱保存，以备提取RNA 。

1.2.4标本测定

根据引物设计，Ⅰ、Ⅲ型胶原及β-action的扩增产物片段应分别为379bp、313bp、550bp，经1.5%琼脂糖电泳并拍照后，与Marker比较。所有RT-PCR照片均用德国TOOLLab VL.11图象处理系统，测定各产物条带密度，计算出Ⅰ、Ⅲ型胶原积分光密度值，测定Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。

1.2.5统计学方法

数值用均数±标准差（ ）表示，SPSS 11.0软件计算，结果之间的比较用单因素方差分析。

2 结果

2.1各组大鼠解剖后，心脏肉眼观、VWW/BW、LVW/BW的比较

肉眼观正常组心脏体积正常，心肌组织弹性正常，颜色鲜红，表面光滑，无斑点；模型组心脏体积明显扩大，心肌组织松弛，颜色暗红，表面光滑；中西药联用组、大剂量组、卡托普利组心脏体积较正常组稍大，心肌组织弹性较好，颜色较鲜红，表面光滑；小剂量组心脏体积明显较正常组增大，但较模型组稍小，心肌组织较松弛。各组大鼠VWW/BW、LVW/BW的比较见表1。

 

表1  各组大鼠VWW/BW、LVW/BW的比较（ ）