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- 抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌基质金属蛋白酶-1及其抑制剂-1表达的影响
- 作者:王振涛|发布时间:2012-11-27|浏览量:632次
王振涛1,韩丽华1,杨凤鸣1,惠玲2
【摘要】 目的:观察抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法:喂饲呋喃唑酮8周建立扩张型心肌病动物模型,随机分组后药物干预8周,检测心肌MMP-1及TIMP-1的表达。结果:与模型组比较:中西药联用组、中药大剂量组和卡托普利组均明显下调MMP-1表达(P均<0.05),上调TIMP-1蛋白表达(P均<0.05)。中药小剂量组也能够下调MMP-1表达(P<0.05),但TIMP-1蛋白表达与模型组无差异(P>0.05)。结论:抗纤益心方能够减轻扩张型心肌病大鼠心肌组织纤维化,其机制与下调MMP-1表达、上调TIMP-1表达有关。河南省中医院心血管内科王振涛
【关键词】抗纤益心方;扩张型心肌病;基质金属蛋白酶;基质金属蛋白酶抑制因子
Study of Kangxianyixin Prescription on MMP-1 and TIMP-1
Expression in Rats with Dilated Cardiomyopathy
Wang Zhentao1,Han Lihua1,Zhu Mingjun2,Yang Fengming1,Hui Ling1
(1 Henan Province Hospital of TCM,2 the First Affiliated Hospital of Henan College of TCM)
【Abstract】 Objective: To expound the mechanism of Kangxianyixin prescription on effect of expression of MMP-1 and TIMP-1 in rats with dilated cardiomyopathy. Methods: Wistar rats with Dilated Cardiomyopathy established by furazolidone were raised 8 weeks,then divided them into groups with random, treated Kangxianyixin prescription and captopril.to observe MMP-1 and TIMP-1 expression in cardiac tissues. Results: Compared with the model group:the high Kangxianyixin prescription dosage and the captopril group,the high Kangxianyixin prescription dosage group and captopril group, could dramatically lower MMP-1 expression(P<0.05) and increase TIMP-1 expression(P<0.05).The low Kangxianyixin prescription dosage group could also lower MMP-1 expression(P<0.05),but could not increase TIMP-1 expression(P>0.05) compared with the model group. Conclusion: Kangxianyixin Prescription can reduce the fibrosis in myocardium of DCM rats. The mechanism is associated with reducing MMP-1 and increase TIMP-1.
【key words】Kangxianyixin Prescription;dilated cardiomyopathy;Matrix metalloproteinases;Tissue inhibitors of metalloproteinases
扩张型心肌病心衰具有很高的病死率和致残率。心肌重塑是引起该病最终出现心力衰竭的重要机制,而心肌细胞外基质(extracellulartrix,ECM)的改变又是心肌重塑的一个决定性方面。在正常机体组织,ECM处于产生和降解的动态平衡中,基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)是体内参与ECM降解最主要的酶系,是心肌重塑的重要推动力量[1]。本研究观察中药复方抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌基质金属蛋白酶-1(Matrix metalloproteinase-1, MMP-1)及其抑制因子-1 (Tissue inhibitors of metalloproteinase-1, TIMP-1)表达水平的变化,探讨其作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验用药 抗纤益心方干浸膏(由党参,黄芪,云苓,白术,丹参,川芎,红花,赤芍,泽兰,益母草组成):由河南省中医院制剂室提供,每克干浸膏相当于生药4g;呋喃唑酮片:福建省三明天泰制药有限公司生产,批号:20050204;卡托普利片:常州制药厂生产,批号:200502242;戊巴比妥钠:中国医药(集团)上海化学试剂公司生产,批号:F20021216。
1.1.2 实验试剂 MMP-1及TIMP-1多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。
1.1.3 实验器材 JY-1001型精密电子天平(上海民桥电子仪器厂);石蜡切片机(德国莱卡公司,型号SM-2000R);光学显微镜(日本OLYMPUS公司);摄影显微镜(德国莱卡公司);Image-Pro Plus 6.0(IPP)图像处理分析系统(美国Media Cybernetics公司)。
1.2 动物造模及分组
选取体重为61.9g±7.0g的Wistar雄性大鼠(郑州大学动物中心提供,合格证号:510116。把动物按5:1随机分为模型组和正常对照组。参照文献方法[2],模型组在饮水中加呋喃唑酮 (按1Kg水加700mg呋喃唑酮配置) 喂养,喂养8周。正常组动物常规饲养,不进行药物干预。
1.3 治疗方法
造模8周后开始药物干预,每天一次给药。正常组动物常规饲养,不进行药物干预;模型组动物每日管饲与治疗组同等容积的生理盐水;抗纤益心方治疗小剂量组动物每日管饲抗纤益心方4.7g/kg/d;抗纤益心方治疗大剂量组动物每日管饲抗纤益心方18.8g/kg/d;卡托普利对照组动物每日管饲卡托普利10.125mg/Kg/d;中西药联用组动物同时管饲卡托普利及抗纤益心方大剂量。灌药同时所有模型组大鼠同时饮用呋喃唑酮水溶液。灌药8周后处死动物。
1.4 心肌取材
动物麻醉后,迅速打开胸腔,取出心脏,滤纸吸干水分,剪去左、右心房及右心室,然后从心尖处沿冠状面切取心肌组织,放入10%中性缓冲福尔马林液中固定,石蜡包埋,制备厚4μm组织切片。
1.5观察指标
MMP-1、TIMP-1阳性表达平均光密度值(OD)的测定:用免疫组化法染色组织切片。光镜下,每只大鼠观察6张切片,每张切片在图像分析系统上随机选取相等的5个高倍视野(×400),测定OD值,每张片子测量后取平均值。平均光密度与阳性染色度成正比,即平均光密度值越大,代表阳性染色越强,染色质含量越高。
1.6 统计学方法
数据用SPSS13.0 For Windows统计分析软件处理,计算所有数据以均数±标准差( )表示;组间比较若符合正态分布采用单因素方差分析,若不符合正态分布采用非参检验。
2 结果
各组MMP-1、TIMP-1阳性表达的比较:光镜下,各组MMP-1和TIMP-1的阳性染色呈棕黄色或棕褐色,阳性区域主要分布于心肌细胞和间质胞浆,见附图1、附图2。
各组MMP-1的OD值比较:与模型组比较,中西药联用组、大剂量组、小剂量组和卡托普利组MMP-1阳性表达减少(P均<0.05),其中以中西药联合组作用最强(与正常组比较无差异,P>0.05)。各组TIMP-1的OD值比较:与模型组比较,中西药联用组、大剂量组和卡托普利组TIMP-1阳性表达增加(P均<0.05),其中以中西药联合组作用最强;但中药小剂量组与模型组比较无统计学差异(P>0.05)。各组MMP-1、TIMP-1阳性表达及OD值比较结果见表1。
表 1 各组MMP-1、TIMP-1 OD值结果比较( )
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