葡萄糖的测定方法主要有酶法、电化学法、光学法、色谱法和微流控技术等。

酶法测定葡萄糖主要依赖葡萄糖氧化酶或己糖激酶的催化反应。葡萄糖氧化酶能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶作用下与显色剂反应生成有色物质，通过比色测定浓度。该方法特异性高，适用于血清、尿液等样本的常规检测，但易受血样中抗坏血酸等还原性物质干扰。

电化学法通过葡萄糖氧化酶修饰电极直接检测反应产生的电子转移。包括安培法和电位法两种形式，前者测量氧化还原电流，后者监测电势变化。便携式血糖仪多采用此技术，具有响应快、用血量少的优势，但电极稳定性会随时间下降，需定期校准。

光学法涵盖近红外光谱、拉曼光谱和荧光检测等技术。近红外光可穿透组织实时监测皮下葡萄糖浓度，拉曼光谱通过分子振动指纹识别葡萄糖分子，荧光法则利用葡萄糖结合蛋白的构象变化产生信号。这些方法可实现无创检测，但易受体温、湿度等环境因素影响。

高效液相色谱和气相色谱能分离复杂样本中的葡萄糖，配合质谱检测器可达到极高灵敏度。适用于药物代谢研究或法医毒理学分析，可区分葡萄糖与其异构体。但设备昂贵、操作复杂，通常不作为临床常规检测手段。

微流控芯片整合样本处理、反应和检测单元，通过纳米材料增强信号或微通道控制流体实现葡萄糖快速测定。该技术耗材少、自动化程度高，在即时检测和连续监测领域有发展潜力，但目前成本较高且标准化程度不足。

日常监测血糖时建议选择经认证的便携式血糖仪，检测前清洁采血部位避免酒精残留影响结果。医院实验室多采用全自动生化分析仪进行酶法测定，结果更精确。特殊人群如新生儿应采用微量样本检测法，研究领域可根据需求选择色谱或光谱技术。无论采用何种方法，均需定期进行质量控制以保证检测准确性。