TGF-β在分泌性中耳炎中耳积液和血清中的表达及意义

 彭易坤¹ 杨洋¹ 俞晓松¹ 熊世珍¹ 姜娅¹ 陈晓玲¹

[摘要] 目的:探讨TGF-β(transforming growth factor)在分泌性中耳炎(secretory otitis media ,SOM)中耳积液和血清中的表达及在SOM发病过程中的意义。方法: 检测40例(48耳)分泌性中耳炎患者中耳积液和血清中TGF-β₁、TGF-β₂含量，并以30例健康成人作对照。结果: 黏液性中耳积液中TGF-β₁水平明显高于浆液性中耳积液(P <0.05)，而TGF-β₂在两种类型的中耳积液中无显著性差异( P ＞0.05)。SOM患者TGF-β₁和TGF-β₂ 在中耳积液中含量较血浆中高( P < 0. 05)；SOM患者TGF-β₁和TGF-β₂的血浆含量较对照组高( P < 0. 05)。病程短者中耳积液中TGF-β₂ 的含量较病程长者高;而病程长者TGF-β₁ 的表达较病程短者增加(均P < 0. 05)。结论: SOM中耳积液中包含了TGF-β₁和TGF-β₂的常规表达，TGF-β₁和TGF-β₂与中耳积液的类型和临床特点有关, TGF-β可能在分泌性中耳炎的发病中发挥了重要作用,并与疾病的持续状态相关; 在分泌性中耳炎的发生及转归中产生重要作用。贵州省人民医院耳鼻喉科彭易坤

[关键词]分泌性中耳炎;TGF-β₁;TGF-β₂; 中耳积液；血清

分泌性中耳炎((secretary otitis media,SOM) 的发病机制还不十分清楚。一般认为咽鼓管阻塞,中耳负压导致血管内液体渗漏形成中耳积液(MEE) 。后来有学者发现咽鼓管阻塞并非引起SOM的必要条件,而中耳积液中的炎症介质和炎性细胞的发现,证实SOM是一炎症反应和渗出的结果^{[1 ,2 ]} 。随着细胞因子(cytokines, CK) 的发现和研究不断发展,作为一种炎症介质和免疫调节因子,与SOM的关系逐步得到重视，其中转化生长因子β( transforming growth factor-β)与中耳疾病的关系日益受到重视。国外已有学者证实MEE中存在IL - 1 ,IL - 6 , IL - 8 , 肿瘤坏死因子- α( TNFα)等^{[3 ,4 ]} 。国内尚无TGF-β与SOM的研究报道。本文旨在通过检测与比较不同病程,不同类型SOM患者MEE及血清中的TGF-β水平,初步探讨TGF-β在SOM发病机理中的作用,为临床诊治SOM提供依据。　

1 　资料与方法

1. 1 　一般资料　收集了2006年1～8月我科临床诊断为SOM的门诊及住院患者共40例(48耳) ,经临床检查,鼓气耳镜检查,纯音测听,声阻抗及诊断性鼓膜穿刺确诊,排除有鼻咽部肿瘤、严重全身疾病及明显变态反应性疾病者。其中男29例,女11例; 年龄14～71岁,平均37.5岁。单耳32例,双耳8例,共48耳.病程3d～5年,平均3个月;≤14d者22例, > 14d者18例.另根据抽取的中耳积液外观特征将其分为黏液性和浆液性,其中黏液性19耳,浆液性29耳。

对照组选自来我院体检人员,经其同意并排除全身系统疾病及SOM病史,共30例,其中男15例,女15例;年龄18～60岁,平均31.8岁。

1.3 　标本的收集

1.3.1 血清标本  所有受检对象均经静脉取全血(枸橼酸钠抗凝) 2 ml ,低温离心(4℃,3 000 r/ min) 20 min ,取血清置于- 20℃深低温冰箱中保存待检。

1.3.2 中耳积液标本　SOM患者外耳道常规消毒,鼓膜表面麻醉,严格无菌操作下于鼓膜前下象限穿刺抽取积液,封口标记,记录积液性质,置于- 20℃深低温冰箱中保存待检。

1. 4  TGF-β的测定。全部指标均采用ELISA法测定TGF-β₁ 和TGF-β₂的含量,其试剂盒（兔抗TGF-β₁、TGF-β₂多克隆抗体）为美国Santa Cruz公司产品,检测仪器为美国产Micro Reader-3型酶标仪,样品需稀释, 使其浓度在标准品浓度范围内。具体步骤按试剂盒说明。

1. 5 统计学方法　两组间的比较采用两两比较的t检验。用SPSS 8.0统计软件进行数据处理。

2 　结果

2.1 不同类型中耳积液中TGF-β₁ 和TGF-β₂的浓度比较　黏液性中耳积液中TGF-β₁水平明显高于浆液性中耳积液( P <0.05), 而TGF-β₂在两种类型的中耳积液中无显著性差异( P ＞0.05)，见表1 。

表1　不同类型中耳积液中TGF-β₁  和TGF-β₂的浓度( Äx±s) ng/ ml

积液类型	耳数	TGF-β1(ng/ml)	TGF-β2(ng/ml)
黏液性	19	110.21 ±15.63	9.28 ± 2.82
浆液性	29	62.38 ±12.36	10.27 ± 1.68

（两组TGF-β₁比较t=11.23, P <0.05; TGF-β₂比较t=1.38, P ＞0.05）

2.2  中耳积液及血清中TGF-β₁ 和TGF-β₂浓度的测定结果　SOM患者中耳积液中TGF-β₁和TGF-β₂浓度明显高于SOM患者血清及对照组血清中TGF-β₁浓度,且差异有显著性( P < 0.05);SOM患者血清与对照组血清中TGF-β₁和TGF-β₂浓度比较有所增高,且差异有显著性( P < 0.05)，见表2 。

表2   SOM组与对照组TGF-β₁  和TGF-β₂含量比较( Äx±s) ng/ ml

组别及标本	样本数	TGF-β1(ng/ml)	TGF-β2(ng/ml)
中耳积液	48	84.32 ±13.53	9.67 ± 2.31
SOM组血清	40	17.38 ± 5.75	2.01 ± 1.12
对照组血清	30	5.82 ± 1.24	1.04 ± 0.54

（中耳积液-SOM组血清两组TGF-β₁比较t=31.08, P <0.05, TGF-β₂比较t=20.29, P <0.05; 中耳积液-对照组血清两组TGF-β₁比较t=39.93, P <0.05, TGF-β₂比较t=24.82, P <0.05; 对照组血清 -SOM组血清中耳积液-对照组血清两组TGF-β₁比较t=12.34, P <0.05, TGF-β₂比较t=4.79, P <0.05）

2.3 病程与中耳积液中TGF-β₁ 和TGF-β₂水平的关系见表3 。按病程长短将中耳积液分为两组,比较其差异,结果显示病程≤14d者, TGF-β₁ 低于病程＞14d者，而TGF-β₂含量高于病程＞14d者，二者均有显著性差异( P < 0.05)。

表3　SOM组不同病程的TGF-β₁  和TGF-β₂ 含量比较( Äx±s) ng/ ml

病程	样本数	TGF-β1(ng/ml)	TGF-β2(ng/ml)
≤14 d	22	64.84 ±15.71	13.41 ± 3.57
> 14 d	18	120.37±15.26	5.64 ± 1.95

(两组TGF-β₁比较t=11.30, P <0.05; TGF-β₂比较t=8.74, P <0.05）

 

3         讨论

转化生长因子β（TGF-β）是一类具有多种生物活性的细胞因子，成熟的TGF-β为一同源二聚体多肽，在哺乳类动物中有三个亚型。TGF-β通过其受体发挥作用，所有类型的细胞都能分泌无活性的TGF-β，即潜在的TGF-β，它不能与其受体结合，从而不能发挥生物学作用，某些蛋白酶如β纤溶酶、组织蛋白酶、尿激酶的都能激活无活性的TGF-β，它对细胞的生长有抑制或促进作用。这取决于特定的细胞类型。在创伤愈合、胚胎发育、细胞外基质的形成和免疫调节等过程中，起重要作用^[5-9]。  近年的研究表明TGF-β在一些疾病纤维化过程中起重要作用。是迄今已知的最强致纤维化因子之一。

Bonewald^[10]和Branton^[11]研究发现TGF-β1在伤口愈合和组织修复中具有重要作用，在受伤和类症发生后，组织启动修复过程，产生和释放的TGF-β1可以刺激多种细胞外基质蛋白的产生和抑制这些蛋白的降解，TGF-β1的这些作用与组织的修复相关，在某此条件下可以恢复组织的正常结构。但是过量的TGF-β1与组织纤维化相关，组织纤维化可以累及正常器官的功能，所以TGF-β1又是介导纤维化性疾病过程的一种重要介质。本研究结果显示TGF-β1在粘液性SOM中，粘液组明显高于浆液组，同时随着病程的越长，TGF-β1浓度越高，粘液性SOM患者纤维化粘连发生也明显高于浆液性SOM 患者，这表明TGF-β₁是导致发生粘连和纤维化的一个重要因素，同时TGF-β₁似乎与SOM的慢性迁延关系更密切；TGF-β₂的浓度在浆液性与粘液性积液之间无明显差异,提示TGF-β不同构型在体内独自调节和表达, 它们在SOM的不同病程发挥不同的作用, TGF-β₂ 可能特定地在慢性炎症的早期表达,本研究与Cooter^[12]基本一致。

综上所述,中耳积液中包含了TGF-β₁和TGF-β₂的常规表达,SOM早期TGF-β₂表达,说明TGF-β₂ 在SOM早期起主导作用；TGF-β₁在SOM 病程中晚期表达非常明显，说明TGF-β₁是导致SOM发生粘连和纤维化的一个重要因素；TGF-β₁和TGF-β₂与中耳积液的类型和临床特点有关,表明了SOM形成的复杂病因和治疗效果欠佳的原因。早期利用基因工程的方法获得TGF-β受体的拮抗剂或TGF-β的受体抗体,应用于中耳腔局部或全身,阻止中耳积液的产生和发展,改进分泌性中耳炎的治疗方法,可避免或减轻由此所致的听力损失；同时早期检测TGF-β₁和TGF-β2含量，从其含量可以预测患者的预后。 

参考文献

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The expression and meaning of transforming growth factorβ in middle ear effusion and serum of secretory otitis media

【Abstract】　Objective 　To study the expression of transforming growth factor beta(TGF-β) in the process of secretory

otitis media(SOM) and its significance. Method :The content of transforming growth factor-beta in blood plasma and middle ear effusion were measured in 40(48 ears) cases of secretary otitis media with effusion and 30 normal subjects respectively.  Result：The levels of TGF-β₁和TGF-β₂ in OME were remarkably higher than those in blood plasma. The levels of TGF-β₁和TGF-β₂ in the OME group were obviously higher than those in the normal control group. It revealed that the shorter the course , the higher the levels of TGF-β₂ ,and the longer the course , the higher the levels of TGF-β₁.Conclusion The SOM middle ear accumulated to include TGF-β1 in the liquid and TGF-β 2 of the normal regulations express, TGF-β 1 and TGF-β 2 accumulate the type of liquid and clinical characteristics with middle ear relevant, the TGF-β may develop an important function in the outbreak secreting secretory

otitis media , and paroxysm continuously the appearance is related; Produce an important function in secrete the occurrence of secretory otitis media  and turn retur.

 [Key words] Secretory otitis media; Transforming growth factor-β_1;Transforming growth factor-β₂; Middle ear effusion; Serum.

 

¹贵州省人民医院耳鼻咽喉科（贵州贵阳，550002）

通信作者：彭易坤（[e-mail]）