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- Eales病人血液中氧化及抗氧化水平分析
- 作者:魏世辉|发布时间:2009-10-19|浏览量:1309次
Eales病是一种病因不明的视网膜血管炎症性疾病。该病主要发生在印度、中国等亚洲国家,病人多为青年男性,是我国青年人致盲的主要原因[1]。由于Eales病主要发生于印度次大陆地区,因此欧美等发达国家开展的研究较少。我国虽然有较高的发病率,但相关的基础研究较少。目前关于本病的研究报道主要来自于印度。到目前为止,关于此病的病因和发病机理的研究尚无明确的结论。以往关于炎症性疾病的研究表明,氧化损伤参与许多炎症性疾病的病理过程。本研究拟对不同时期Eales病人血液中氧化及抗氧化水平进行分析比较,进而评价氧化应激与Eales病发病的相关性。北京301医院眼科魏世辉
1、材料和方法:
1.1研究对象的选择及分组
本研究选择Eales病首发病例、治愈病例各10例为研究对象,同时选择健康男性献血队员10例为正常对照。所有研究对象均为男性,年龄在20-40之间。所有实验对象均无肥胖症,无特殊饮食习惯及吸烟、嗜酒等不良嗜好。在采集血液标本之前1个月内,没有服用激素及抗氧化剂等药物。
本研究的Eales病诊断标准在参考Biswas,MS等提出的Eales病诊断标准的基础上[2],结合我们具体的临床实际情况做适当的修改,对性别、年龄、症状、双眼病变、眼底改变及FFA改变等进行了更为严格的要求,旨在提高诊断的准确率,确保入选病例的代表性。以玻璃体积血吸收或手术清除,无玻璃体视网膜增殖性改变;视网膜周边可见静脉白鞘或硬化但无视网膜水肿及出血;荧光血管造影无静脉渗漏作为Eales病临床治愈标准。
1.2 Eales病人血液中氧化损伤标记物的检测
本研究以8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)作为DNA氧化损伤的标记物,以巴比妥酸盐反应物质(TBARS)作为脂质过氧化的标记物,通过对不同时期Eales病人血液中这两种物质含量的检测,判断Eales病人体内的氧化损伤水平。
1.2.1 Eales病人血液中8-OHdG的检测:取EDTA抗凝血100ul,应用全血基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA,提取的DNA的浓度和纯度经紫外分光光度计测定。取5ugDNA应用核酶P1及碱性磷酸酶进行水解使其分解为单个核苷。水解后产物用Wizard DNA Clean-up System进行除盐、除酶的纯化处理。纯化后的水解产物在乙腈的催化下与BSTFA进行衍生化反应。衍生化产物应用气相色谱质谱联用仪(GC/MS)进行检测。检测方式为选择离子检测(SIM),定量离子质核比(m/z)为383及368[3][4]。8-OHdG的含量以检测样品与标准品色谱峰面积(AA)的比值计算。
1.2.2 Eales病人血清中TBARS的检测:取血清标本100ul,应用TBARS检测试剂盒测定不同时期Eales病人血清中丙二醛(MDA)含量。
1.3 Eales病人血清中抗氧化能力的检测
本研究应用总抗氧化能力测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒及维生素E测定试剂盒分别对研究对象血清中总抗氧化能力、总SOD活力、GSH-PX活力及维生素E含量进行测定。拟从酶促及非酶促两方面对Eales病人血清的抗氧化能力作出评价。
1.4 统计分析:
所有实验数据均应用SPSS12.0统计软件进行方差分析,各组数据间两两比较采用LSD方法。
2.结果:
2.1不同时期Eales病人血液中8-OHdG含量均显著高于健康对照组;首发病例组血液中8-OHdG含量显著高于治愈病例组(表1)。
表1:不同时期Eales病人血液中8-OHdG含量
组 别 8-OHdG(ng) P值 |
正常对照 8.18±0.754 首发病例 25.23±0.762 <0.001* 治愈病例 13.90±2.186 <0.001* <0.001△ |
注:*Eales病例组与健康对照组的比较 △首发病例与治愈病例的比较
2.2
不同时期Eales病人血清中MDA含量均显著高于健康对照组;首发病例组血清中MDA含量显著高于治愈病例组(表2)。
表2:不同时期Eales病人血清中MDA含量
组 别 MDA(nmol/ml) P值 |
正常对照 13.055±1.68 首发病例 48.066±6.52 <0.001* 治愈病例 31.616±1.92 <0.001* <0.001△ |
注:*Eales病例组与健康对照组的比较 △首发病例与治愈病例的比较
2.3
首发病例组Eales病人的血清总抗氧化能力显著低于健康对照组;治愈病例组Eales病人的血清总抗氧化能力显著低于健康对照组;首发病例组血清总抗氧化能力显著低于治愈病例组(表3)。
表3:不同时期Eales病人血清总抗氧化能力
组 别 T-AOC(U/ml) P值 |
正常对照 8.93±0.95 首发病例 6.86±1.36 <0.001* 治愈病例 7.87±0.50 <0.05* <0.05△ |
注:*Eales病例组与健康对照组的比较 △首发病例与治愈病例的比较
2.4
首发病例组Eales病人的血清总SOD显著低于健康对照组;治愈病例组Eales病人的血清总SOD显著低于健康对照组;首发病例组血清总SOD显著低于治愈病例组(表4)。
表4:不同时期Eales病人血清总SOD活力
组 别 SOD (U/ml) P值 |
正常对照 121.383±15.46 首发病例 90.953±6.97 <0.001* 治愈病例 103.153±12.38 <0.01* <0.05△ |
注:*Eales病例组与健康对照组的比较 △首发病例与治愈病例的比较
2.5
首发病例组Eales病人的血清GSH-PX活力显著低于健康对照组;治愈病例组Eales病人的血清GSH-PX活力显著低于健康对照组;首发病例组血清GSH-PX活力显著低于治愈病例组(表5)。
表5:不同时期Eales病人血清GSH-PX活力
组 别 GSH-PX(U) P值 |
正常对照 168.08±14.26 首发病例 115.896±22.2 <0.001* 治愈病例 134.369±14.35 <0.001* <0.05△ |
注:*Eales病例组与健康对照组的比较 △首发病例与治愈病例的比较
2.6
首发病例组Eales病人的血清VitE含量显著低于健康对照组;治愈病例组Eales病人的血清VitE含量显著低于健康对照组;首发病例组血清VitE含量显著低于治愈病例组(表6)。
表6:不同时期Eales病人血清VitE含量
组 别 VitE(ug/ml) P值 |
正常对照 11.74±1.62 首发病例 7.03±1.06 <0.001* 治愈病例 9.84±1.67 <0.01* <0.001△ |
注:*Eales病例组与健康对照组的比较 △首发病例与治愈病例的比较
3.讨论
3.1 8-OHdG被公认为是DNA氧化损伤的一种主要标记物,其在DNA复制与修复过程中可诱发DNA点突变。研究表明,一些肿瘤及糖尿病患者血中8-OHdG含量明显高于正常人。因此,对血液中8-OHdG的测定是评价或诊断与氧自由基相关疾病的重要指标[5]。丙二醛(MDA)是脂质过氧化的终末产物。研究表明,MDA可与蛋白质、核酸等多种生物分子发生反应,可诱导基因突变。在炎症性疾病中,MDA可诱导多种炎症因子的表达,进而导致组织损伤[6]。因此,血清中MDA浓度的变化直接反映体内脂质过氧化的水平[7]。本研究通过对不同时期Eales病人血液中8-OHdG 及MDA含量的检测,评价Eales病人体内的氧化损伤水平。结果表明,Eales病人体内氧化损伤水平较对照组明显升高,且首发病例组血液中氧化损伤水平显著高于治愈病例组。
3.2 机体的抗氧化体系主要包括酶促抗氧化系统及非酶促抗氧化系统两部分。酶促抗氧化系统主要包括超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及过氧化氢酶(CAT)等。非酶促抗氧化系统包括抗氧化维生素、氨基酸和金属蛋白质等。在本研究中,我们拟通过对Eales病人血清总抗氧化能力、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及维生素E(VitE)的水平进行检测,从酶促及非酶促两方面对Eales病人血清的抗氧化能力作出评价。结果表明,各时期Eales病人的血清抗氧化能力显著低于健康对照组;治愈病例组血清抗氧化能力虽然较首发病例组有所升高,但仍显著低于正常对照组。
3.3氧化应激是指氧化与抗氧化水平失衡,具有导致氧化损伤潜在危险的状态[8]。Sulochana K.N等曾报道Eales病人玻璃体内TBARS含量增加而SOD、GSH-PX等抗氧化酶水平下降[9] 。本研究着眼于对Eales病人机体总氧化及抗氧化水平进行分析。结果表明,Eales病人体内氧化水平升高而抗氧化水平下降,且这种氧化与抗氧化水平失衡的状态在Eales病临床治愈阶段仍然持续。提示氧化应激与Eales病的发病具有一定的相关性。
视网膜组织对氧化损伤十分敏感。在对葡萄膜炎、Behcet’s病、老年性黄斑病变及糖尿病视网膜病变的研究中均发现有氧化损伤机制的存在[10][11]。曾有报道补充VitE能有效的延缓Behcet’s病的临床症状,口服VitC、E对提高葡萄膜炎病人视力有一定的作用。结合本研究的结果,推测补充维生素C、E等抗氧化物质可能对Eales病的治疗和预防起重要的作用。
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