RASSF1A基因甲基化与妇科肿瘤发生发展的关系研究进展

Ras相关区域家族1A基因（RASSF1A）是从人3号染色体短臂克隆出来的一种新型肿瘤抑癌基因。研究发现，多种妇科肿瘤的发生与RASSF1A启动子异常甲基化造成的基因表达缺失有密切的关系。现将RASSF1A基因甲基化与妇科肿瘤发生发展的关系研究进展情况综述如下。山东大学齐鲁医院妇科张师前

1   RASSF1A的结构和功能

Ras相关区域家族1（RASSF1）基因有5个不同的转录本：RASSF1A～E，其中RASSF1A最为常见。RASSF1A基因全长1 873 bp，含340个氨基酸的开放阅读框，编码相对分子质量为388 000的蛋白多肽，其N端与富含半胱氨酸的甘油二酯或氟波酯结合区高度同源，故又称蛋白激酶C保守区^[1]。

研究发现，多种肿瘤组织中存在RASSF1A启动子区异常甲基化和表达缺失，提示RASSF1A作为抑癌基因在多种肿瘤发生发展中发挥重要作用。RASSF1A作为抑癌基因发挥作用的机制目前尚不明确。主要有以下两种观点：①通过对Rb族的细胞周期检查点起作用而诱导细胞周期的停滞^[2]。细胞周期蛋白(cyclin)  D1的累积可以形成一个旁路，使细胞绕过1个G₁-S期检查点而促进细胞增殖。RASSF1A在翻译水平上抑制了cyclin D1的聚集，从而阻断了其介导的细胞增殖旁路，继而阻止细胞从G₁期到S期的转变，使细胞周期停滞。②Ras基因在具有促进生长增殖作用的同时，还具有抑制生长、促进细胞凋亡和衰老的功能，而RASSF1A可能是Ras下游信号转导中的一个效应物，以三磷酸鸟苷依赖的形式与Ras相互作用，促进细胞凋亡、衰老和坏死。RASSF1A启动子甲基化造成的抑癌基因失活是多种妇科肿瘤发生的重要途径^[3]。研究表明，RASSF1A启动子甲基化在中国女性原发性乳腺癌形成中是一种常见现象^[4]。RASSF1A在正常组织中100%表达，但在肺癌、乳腺癌、卵巢癌、鼻咽癌、前列腺癌和膀胱癌等大多数肿瘤中存在启动异常甲基化而使基因表达缺失^[5]。

2   RASSF1A甲基化与子宫颈癌

Yu等^[6]观察了4株子宫颈癌细胞株、50例原发性子宫颈癌患者(其中鳞癌33例，腺癌17例)和11例对照组织中RASSF1A的表达情况，结果发现30%的子宫颈鳞癌和12%的子宫颈腺癌组织表现为RASSF1A启动子的甲基化异常，4株子宫颈癌细胞株中有一株出现RASSF1A甲基化异常，而在对照组织中则没有RASSF1A异常甲基化的情况。在另一项实验中，研究者应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP)检测子宫颈癌组织中RASSF1A的甲基化状态，结果发现45%子宫颈腺癌组织中RASSF1A存在异常甲基化状态^[7]。一项较大样本的试验研究^[8]对45例子宫颈轻度鳞状上皮内病变、63例子宫颈重度鳞状上皮内病变、107例子宫颈鳞状细胞癌、23例子宫颈腺癌和44例正常子宫颈组织中的RASSF1A甲基化情况进行检测，结果发现，17.5%的子宫颈重度鳞状上皮内病变、15%的子宫颈鳞状细胞癌、26.1%的子宫颈腺癌出现RASSF1A启动子异常甲基化，而子宫颈轻度鳞状上皮内病变和正常组织中则没有RASSF1A启动子异常甲基化的出现。

子宫颈癌的发生与高危型人类乳头瘤病毒（HPV）持续感染密切相关。Kuzmin 等^[9]检测了8株子宫颈癌细胞株RASSF1A甲基化状态，结果发现，2株HPV阴性的子宫颈癌细胞株中存在RASSF1A启动子异常甲基化且其基因表达缺失，而其余6株HPV阳性的子宫颈癌细胞株中表达RASSF1A mRNA，提示RASSF启动子甲基化与HPV感染有关，其原因可能是RASSF1A与HPV有相同的致癌通路，但具体的发生机制尚需进一步研究。

3  RASSF1A甲基化与卵巢癌

Makarla等^[10]采用MSP方法分析23例卵巢良性肿瘤、23例卵巢交界性肿瘤和23例卵巢癌中包括RASSF1A在内的8种抑癌基因和肿瘤相关基因启动子甲基化情况。结果发现，RASSF1A启动子异常甲基化仅在卵巢癌组织中存在，发生率为30%，在卵巢良性肿瘤和卵巢交界性肿瘤中则没有RASSF1A启动子异常甲基化的发生，提示RASSF1A启动子区域甲基化是卵巢上皮性癌发生的经常性事件。Teodoridis等^[11]研究晚期卵巢癌中RASSF1A启动子甲基化情况时发现，晚期卵巢癌组织中该基因启动子异常甲基化的频率为26.4%。新近一项研究发现，原发性卵巢癌组织中RASSF1A甲基化发生率高达49%^[12]。上述研究均提示卵巢癌的发生与RASSF1A启动子异常甲基化有较大关系，从而为RASSF1A作为一种新的候选肿瘤标志物应用于卵巢癌诊断提供了理论基础。

Ibanez等^[13]采用MSP检测50例卵巢癌或原发性腹腔肿瘤的肿瘤组织、术前血清或血浆、腹水或腹腔冲洗液细胞DNA中RASSF1A和BRCA1因启动子甲基化的情况，结果发现34例肿瘤相关样本DNA中出现一种或两种启动子甲基化，基因表达缺失。进一步联合分析p14ARF、 p16INK4a基因和凋亡相关蛋白激酶、其他肿瘤抑癌基因等启动子甲基化指标，发现在剩余的16例样本DNA中存在上述基因的异常甲基化，这样诊断的范围就扩大到100%，有较好的敏感性。而且随后对40例正常对照人群的卵巢组织、血清或腹腔冲洗液中DNA的检测，并未发现启动子区域的甲基化，而在ⅠA或ⅠB卵巢癌患者血清和腹水细胞学检查阴性的患者中发现启动子区域的甲基化，提示RASSF1A等基因启动子异常甲基化是卵巢癌发生发展中的早期事件，并且可以利用外周血清、腹水和（或）腹腔冲洗液等体液检测RASSF1A启动子甲基化，这为卵巢癌的诊断提供了新的途径。进一步的研究发现，将去甲基化制剂 [1-(β-D -呋喃核糖苷)-1,2 -二氢嘧啶-2-酮]作用于卵巢癌细胞株后，RASSF1A基因启动子异常甲基化的状态消失，基因重新转录表达，可见肿瘤细胞增殖受到抑制，肿瘤体积缩小，提示单独应用去甲基化制剂或联合传统治疗方法可以对耐药的卵巢肿瘤有较好的治疗效果^[14]。

4   RASSF1A甲基化与子宫内膜癌

约有20%的子宫内膜癌可以出现微卫星不稳定性( MSI)，明显高于其他恶性肿瘤。MSI与基因启动子异常甲基化密切相关。Kang 等^[15]研究发现，75例子宫内膜癌组织中有25例出现RASSF1A启动子异常甲基化。绝经前妇女子宫内膜癌组织中RASSF1A启动子异常甲基化的发生率高达70%，提示绝经前RASSF1A启动子区域甲基化是子宫内膜癌发生过程中的早期事件^[16]。

Fiegl等^[17]利用甲基化荧光定量聚合酶链反应方法检测15例子宫内膜癌患者和109例对照组病例中阴道分泌物的DNA样本，分析样本中包括RASSF1A在内的5个基因启动子甲基化情况，结果发现100%的子宫内膜癌患者阴道分泌物中出现3～4个基因启动子异常甲基化，而91%的对照组样本出现少于3个基因启动子甲基化。提示针对子宫内膜癌组织中RASSF1A异常甲基化发生率较高的情况，联合RASSF1A和其他在子宫内膜癌中甲基化发生率较高的基因，将其启动子异常甲基化状态的出现作为诊断标志物，共同对内膜癌进行早期诊断，尤其是对具有子宫内膜癌高危因素但无明显体征的患者进行诊断具有重要临床价值。

最近Jo等^[18]分析70例子宫内膜癌患者中RASSF1A甲基化情况，结果发现，有36例存在RASSF1A基因启动子异常甲基化，出现RASSF1A启动子异常甲基化的子宫内膜癌患者与不出现RASSF1A启动子异常甲基化的子宫内膜癌患者相比，前者有较高的肿瘤复发率和较低的无瘤生存率。表明RASSF1A启动子甲基化有可能成为子宫内膜癌诊断和预后评价的一个临床指标。

总之，RASSF1A作为重要的抑癌基因，其启动子区域异常甲基化造成的基因表达缺失和抑癌功能丧失，在子宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌的发生发展中起到了重要作用。RASSF1A可作为一种新的标志物用于上述妇科肿瘤的诊断和预后判断。另外，应用去甲基化制剂可恢复RASSF1A基因的转录表达，提示其有可能成为肿瘤基因治疗的候选靶点。