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- 宫念樵主任医师
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华中科技大学同济医学院附属同济医院
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器官移植
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- Blimp1基因干预调控诱生耐受态DC下调同种移植免疫反应
- 作者:宫念樵|发布时间:2012-08-22|浏览量:565次
目的 通过反义抑制造血干细胞(HSC)Blimp1基因和蛋白表达,调控HSC源DC分化过程,诱导耐受态DC生成,降低同种免疫反应强度。
方法 获取Balb/C小鼠骨髓成分,免疫磁珠法分离获得HSC,建立DC定向分化体系,于分化第8天获得DC,采用MHC-II、CD80、CD86、CD11c进行DC分化和成熟度鉴定。反义基因干预的组别于HSC培养第二天进行慢病毒载体Blimp1-siRNA基因治疗或Blimp1-siRNA电转染,转染后荧光监测转染率,基因治疗第四天和培养终止前Western-blot和real-time RT-PCR检测DC Blimp1 蛋白和mRNA表达。试验分组:1,空白对照组;2,电转染组;3,慢病毒载体转染组。获取C57小鼠淋巴结细胞,制备单细胞悬液。建立CFSE-MLR培养体系,以CD3/28单克隆抗体孵育为阳性对照,以C57 T细胞刺激为阴性对照,采用流式细胞术观察CD3、CD4、CD8 T细胞增殖指数。武汉同济医院器官移植外科宫念樵
结果 空白对照组DC培养终末DC占全体细胞比列62.4%,MHC-II+CD80+CD86+细胞比例占CD11c+46.3%;CFSE-MLR 阳性对照CD3+细胞增殖指数为3.56,阴性对照增殖指数为1.10, 增殖T细胞中CD4+强于CD8+细胞。电转染组转染第一天荧光阳性率为35%,气候持续升高,至培养终末为76%;蛋白和mRNA表达较空白对照组明显下降;DC培养终末DC占全体细胞比列70.3%,MHC-II+CD80+CD86+细胞比例占CD11c+26.3%; CFSE-MLR CD3+阳性对照增殖指数为1.65,阴性对照增殖指数为1.06。慢病毒载体转染组转染第一天荧光阳性率为15%,气候持续升高,至培养终末为46%;蛋白和mRNA表达较空白对照组明显下降,但较电转染组为高;DC培养终末DC占全体细胞比列69.2%,MHC-II+CD80+CD86+细胞比例占CD11c+35.3%; CFSE-MLR CD3+阳性对照增殖指数为2.05,阴性对照增殖指数为1.09。
结论 Blimp1反义基因治疗明显促进DC向耐受态分化,并显著下调同种移植免疫反应强度。
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81072441)
作者单位:430030 武汉 华中科技大学同济医院器官移植研究所 教育部/卫生部重点实验室
通信作者:宫念樵,E-mail: nqgong@tjh.tjmu.edu.cn
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