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- 肺癌的肿瘤标志物检查
- 作者:张伟|发布时间:2010-06-21|浏览量:767次
山东中医药大学附属医院肺病科张伟
一、癌胚抗原
癌胚抗原(CEA)于1965年由加拿大医生Glod首先发现,随后经不断纯化后,现已广泛地应用于临床,可用于所有能生产和分泌CEA并可进入局部体液和血循环的各种肿瘤,如结肠癌、直肠癌、肺癌、胰腺癌,在这些病人的血清、血浆及各种体液中,都可检测出CEA的增高。CEA测定有助于辅助诊断、判断预后和疗效检测,但其假阳性和假阴性都较高。
CEA是一种糖蛋白,结构复杂,分子量为20×104,除含有癌抗原特异性决定族外,还存在与健康人体内的非特异性多种抗原相一致的共同抗原决定族。因而,临床上有CEA多克隆抗体(多抗)与CEA单克隆抗体(单抗)之分,而后者的特异性更高。
以多抗法测定肺癌患者SCEA时,不同病理类型之间的阳性率不同,以腺癌较高,依次是小细胞癌、鳞癌。这种差异可能与肺癌细胞的分化程度有关,也可能与使用的抗体的特异性有关。
目前发现,不同的CEA抗原决定族,不同厂家生产的CEA药盒,对不同的肿瘤和不同类型的肺癌的阳性率可有较大的差别。如果能识别不同的CEA抗原决定族,制备不针对不同肿瘤或不同肺癌类型的特异性更高的CEA试剂盒,可进一步提高阳性率和检测的特异性。
SCEA检测阳性率与肺癌患者的病期也有比较密切的关系,有显著的差异,科检测病情变化,当发现在正常值以上3倍时,将预示可能有全身转移。对于肺癌手术的患者,在术后可有短期SCEA升高,一般会在2个月左右下降恢复,如长期不下降或继续升高,应当考虑有转移的可能。
目前常用的CEA检测方法有放射免疫法和酶联免疫法。
二、β2微球蛋白
β2微球蛋白在多种血液系统性疾病和实体恶性肿瘤中升高,并与CEA呈负相关。肺癌患者血清β2微球蛋白的阳性率,欧洲为18%~21%,日本为53.5%~90%。
与CEA同时检测,两者有互补性,可使更多的患者出现阳性标志,更有利于判断预后。肺癌初诊或复发的患者SCEA阳性率以腺癌最高,其次是鳞癌、SCLC;β2微球蛋白的阳性率则以腺鳞癌、鳞癌最高,其次为腺癌、SCLC。SCEA测定值随病情的进展而增高,随病情的控制可降低或正常,而β2微球蛋白的结果正好相反。
SCEA浓度与肺癌患者预后密切相关,特异性较高,但阳性率较低,尤其在肺癌的早期更是如此;β2微球蛋白的阳性率较高,但也有较高的假阳性。两者联合应用,便可优势互补,便于发现更多肿瘤标志阳性的患者,利于检测病情变化和确定更合理的化疗间歇期,更有利于早期发现肿瘤复发,便于抓住时机检查和治疗。
三、铁蛋白
铁蛋白(Ferritin)是人体中普遍存在的铁储备蛋白,在铁的储存和代谢方面起重要的作用。今年来,作为肺癌的肿瘤标志物科协助诊断和检测预后。然血清铁蛋白不是一种特异性的肿瘤标志物,在肺部疾病鉴别诊断中的意义不是很大,也无助于肺癌的早期诊断,但对检测肺癌病情的演变,肿瘤的消长、复发和转移仍有一定的临床价值。
在肺癌患者中,约有1/3的患者铁蛋白增高,其原因至今未明,一般认为于肿瘤细胞合成和分泌铁蛋白的能力异常有关,也可能与肿瘤细胞本身的坏死有关,与化疗或放疗导致的组织损伤和细胞破坏有关,从而使细胞浆内的铁蛋白释放增加,以及肝功能受到损伤后对铁蛋白的清除减少有关。
铁蛋白还可作为鉴别胸腹水良性或恶性的良好指标,当胸腹水中铁蛋白浓度>500ng/ml时,应怀疑恶性;当>1000ng/ml时,有助于恶性诊断的确立,其敏感性为76%,特异性为94%,阳性诊断准确性为91%,而阴性诊断的准确性为83%。
在测定胸腹水中铁蛋白时,不必同时测定血清铁蛋白或计算胸腹水与血清铁蛋白的比值。
四、神经元特异性烯醇化酶
神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)是神经母细胞瘤的肿瘤标志物,由于SCLC是最常表现由神经内分泌性质的肿瘤,目前NSE也是SCLC最敏感最特异的肿瘤标志物。近年来,NSE作为神经元损伤的敏感性和特异性标志,其与中枢神经系统疾病的关系已引起了国内外学者的极大关注。
1、生化特性
NSE是催化糖原酵解途径中甘油分解的最后的酶。由3个独立的基因片段编码3种免疫学性质不同的亚基α、β、γ,组成5种形式的同工酶αα、ββ、γγ、αγ、βγ。二聚体是该酶分子的活性形式,γ亚基同工酶存在于神经原和神经内分泌细胞的胞浆中,称为NSE。α亚基同工酶定位于胶质细胞,其结构和免疫学特性与肝脏中的烯醇化酶相同,称为非神经原特异性烯醇化酶(NNE);NSE和NNE的分子量分别为78kD和87kD。
2、测定方法与正常参考值
烯醇化酶的测定方法主要有两类,一是酶活性测定法,一是酶含量测定法。酶活性测定法主要有直接分光光度法、酶偶联速率法、生物发光法和琼脂糖凝胶电泳法等,酶含量测定主要采用免疫化学法。
目前NSE测定最常用的方法有RIA和ELISA两种,RIA有放射污染,而ELISA无RIA的不足,并且灵敏度较高。国内陈惠鹏等建立的ABC-ELISA灵敏度为2ng/ml;军事医学科学院建立的ELISA测定试剂盒,灵敏度达1ng/ml,且操作简便,重复性好。最近国外学者报道用时间分辨荧光免疫分析法测定血清NSE,其重复 性好,灵敏度、特异性与RIA法一致,相关系数为0.99,正常参考值女性为2.9~9.6μg/L,男性为3.4~11.7μg/L,性别间有显著差异(P<0.001)。不同方法的NSE测定值有一定差异,一般说来,健康成人血清NSE水平在10ng/ml以下均属正常。
3、临床意义
NSE是神经母细胞瘤和小细胞肺癌的标志物。神经母细胞瘤是常见的儿童肿瘤,占1~14岁儿童肿瘤的8%~10%。NSE作为神经母细胞瘤的标志物,对该病的早期诊断具有较高的临床应用价值。神经母细胞瘤患者的尿中NSE水平也有一定升高,治疗后血清NSE水平降至正常。血清NSE水平的测定对于监测疗效和预报复发均具有重要参考价值,比测定尿液中儿茶酚胺的代谢物更有意义。小细胞肺癌(SCLC)是一种恶性程度高的神经内分泌系统肿瘤,约占肺癌的25%~30%。它可表现神经内分泌细胞的特性,有过量的NSE表达,比其它肺癌和正常对照高5~10倍以上。SCLC患者血清NSE检出的阳性率可高达65%~100%,目前已公认为NSE可作为SCLC高特异性、高灵敏性的肿瘤标志物,有报道;NSE水平与SCLC转移程度相关;但与转移的部位无关;NSE水平与其对治疗的反应性之间也有一个良好的相关性。
五、细胞角蛋白
细胞角蛋白是细胞体的中间丝,根据其分子量和双向二维电泳中等电点的不同可以分为20种不同类型,能在正常细胞、肿瘤细胞、细胞培养中分化不同的上皮细胞表达。细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、组织多肽抗原(TPA)、组织多肽特异性抗原(TPS)都是细胞角蛋白的标志物。
1、CYFRA21-1
在肺癌中含量尤其丰富,尤其是NSCLC患者的血清及胸水中CYFRA21-1浓度升高,其敏感性随病情进展而增高,与肺癌的分期呈正相关,其敏感性也较高,对鳞癌的敏感性为50%~70%,对腺癌为30%~50%,对SCLC为20%~50%。CYFRA21-1与放疗、化疗及其临床反应有良好的相关性,对化疗有效的患者,血清CYFRA21-1水平将明显降低,肺癌手术后其血清浓度也降低,并与肺癌患者的生存期密切相关,血清CYFRA21-1水平高者,预后不良,尤其可作为肺鳞癌生存及复发的一种独立性的预后因素。但在支气管灌洗液中的CYFRA21-1水平,不能用于鉴别量恶性肺疾患。
2、TPA
是细胞角蛋白8、18、19片段的一部分,其表达反映细胞增生活跃。TPA是通过单克隆抗体确定的能识别增生肿瘤细胞释放了TPA的特异性M3抗原决定蔟。肺癌患者血清中TPA检测的敏感性为30%~60%,特异性为65%~90%。TPA水平与临床治疗的疗效及临床分期密切相关,随TNM分期进展,TPA水平增加,能预示肿瘤有无复发,但与组织类型无关,对SCLC不敏感。
3、TPS
NSCLC患者血清中TPS检测的敏感性为36%,特异性为90%。在伴淋巴结转移的NSCLC患者及在化疗中病情仍进展患者,血清中TPS明显增高。TPS是重要的预后因素之一,其水平高者,其生存期也短;治疗前TPS高的患者,可能预示对化疗不敏感和预后不良。
六、鳞癌细胞抗原
鳞癌细胞抗原(SCC-Ag)是1977年由Koto从子宫组织中提取的一种糖蛋白,对多种鳞癌都有不同的特异性和敏感性。
SCC-Ag对肺鳞癌的敏感度为33%~78%,特异度为89%~100%,但对其他类型肺癌的临床意义不大。血清SCC-Ag水平与肺癌病期呈正相关,随肿瘤扩散和转移而增高,Ⅲb、Ⅳ肺鳞癌患者的阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲa患者;初始SCC-Ag水平与肺鳞癌患者的生存期密切相关,可作为判断肺鳞癌预后和检测疾病进展的指标。
七、碳水化合物抗原
碳水化合物抗原(CA)是一系列肿瘤的相关抗原,是细胞膜上的大分子糖蛋白,主要有CA19.9、CA50、CA125等。
CA19.9及CA50检测肺癌的敏感性为44%~51%,特异性为67%~69%。治疗前CA19.9与病期呈正相关,但与预后无关,治疗后约有1/5的患者CA19.9下降。有远处转移的肺癌患者,其血清CA50高于无转移者。
CA125是最重要的卵巢癌相关性抗原,对肺癌患者而言,CA125水平与TNM分期呈正相关,血清CA125高者均为晚期患者,其生存期比正常者缩短,复发的可能性增高,可单独提示NSCLC的预后。
八、肺癌基因诊断
20世纪生物医学发展的重要特点之一,是对生命现象的认识逐渐向分子微观水平深入。进入21世纪后,基因及基因诊断不再是“高深莫测”的东西。
1、基因诊断
指在基因水平上运用现代分子生物学和分子遗传学方法,直接检测作为生命物质的基因的存在和缺陷、基因结构及其表达功能是否异常,从而对疾病(癌症)或人体状态作出诊断。
基因诊断常用的实验技术和检测方法:蛋白质水平有免疫组化、Westem blot;在DNA水平有凝胶电泳、PCR、PCR-SSCP、序列分析、原位杂交、South-ern杂交;在RNA水平有凝胶电泳、RT-PCR、原位杂交、Northern杂交等。
2、肺癌的基因诊断
分子生物学研究表明,肺癌的发生发展是一个遗传易感因素占重要地位,涉及到一系列基因(癌基因和/或抑癌基因)异常改变的复杂过程。由正常细胞向癌细胞恶性转化进程中的启动阶段、促进阶段、进展阶段等整个演变过程,均涉及到癌基因的激活突变、扩增及过度表达;抑癌基因的失活功能异常(主要失活方式为缺失、点突变和甲基化);以及某些染色体片段的丢失等,从而导致细胞动力学周期正常演进的紊乱,细胞增殖失控无限生长和恶性转化形成癌肿。研究肺癌发生发展中的分子事件,对基因进行检测分析,特别是对抑癌基因p16、Rb的研究,可建立起一种比较理想的肺癌早期诊断分子生物学检测指标。
①癌基因
与肺癌相关的癌基因主要有myc基因家族(C-myc,N-myc,L-myc)、ras基因家族(K-ras,H-ras,N-ras)和Her-2/neu基因,均为显性致癌基因,在肿瘤形成过程中只需一条基因模板发生突变,所产生的突变体蛋白就可启动细胞增殖信号而使细胞无限繁殖。
研究表明,myc家族几乎与所有小细胞肺癌和许多非小细胞肺癌的发生有关;ras家族基因突变与不良预后有关,其通过特定部位的密码子发生突变而活动,其产物p21与G蛋白有关,可为细胞生长传递持续促有丝分裂信号,导致细胞不断增殖,有ras突变的肺癌患者较无突变者生存期缩短;Her-2/neu基因编码一种特异的跨膜电位酪氨酸激酶p185,在非小细胞肺癌中,该基因通过p185蛋白的表达,启动细胞生长分化信号,细胞分化越差,p185阳性率越高,该基因的过度表达与肺癌侵袭转移及多重耐药性有关(特别是肺腺癌)。
与肺癌有关的其它癌基因还有:C-myb、C-fos、bcl-2、C-erbB2等。
②抑癌基因
与肺癌相关的抑癌基因主要有p16、Rb、p53基因,需二条模板都发生突变时,肿瘤才会发生。
研究发现, p53的缺失或点突变、p16在人类肿瘤发生发展中可能作为早期的激发事件,这就为早期诊断肺癌提供了理论依据。Rb是最早分离出来的抑癌基因,其编码产物在细胞周期调控中发挥重要作用。P16为最新发现并克隆的抑癌基因,其失活在多数肿瘤中存在。从分子病理学角度看,肺癌的发生演变首先是3P等位基因丢失,接着出现9p区域基因变异(p16基因正定位于9p21区域),最后才出现p53基因或ras基因改变。
NSCLC中70%~80%发生p16缺失,而Rb缺失仅为22%;而SCLC中95%以上有Rb缺失突变,提示p16基因在肺癌发生发展中起着极为重要的作用,p16、Rb基因不但有可能用作肺癌早期诊断的重要检测指标,还可用作SCLC与NSCLC早期分型诊断的重要依据。
众所周知,任何肿瘤的早期诊断都不能靠完全单一的方法完成,必定是多种诊断方法的互补。无论是肿瘤标志物还是肺癌基因,都不能单一的完全确诊肿瘤,必须与临床紧密结合,才能做出早期诊断,进行分型、分级、分期,采取合理的恰如其分的治疗方法,并对治疗效果、预后、转移潜能等做出预测。
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