如何测定实体瘤组织中肿瘤血管生成状况?

    由于对肿瘤组织血管密度与肿瘤预后之间相关性的研究很大程度上受到肿瘤组织血管密度检测方法学的影响，采用不同的对检测方法可能得出研究结果，因此，使用统一的肿瘤组织血管密度检测方法是不同研究者结果之间可以相互比较的先决条件。在2002年，P.B. Vermeulen等人在《欧洲癌症杂志》上发表了“关于实体瘤组织切片中血管生成定量的方法学和判定标准的第二次国际共识意见”，为实体瘤组织切片中血管生成定量提供了统一的标准。（详细内容见下述）无锡市第四人民医院肿瘤科常树建

1 微血管密度的相对估计（chalkley count）

  计量单位：无

  方法学：

  1．）取某一个有代表性的肿瘤切片行抗CD34的免疫组织化学标记。

  2．）chalkley点重叠形态测定法（chanlkley point-overlap morphometry）: 在低倍数显微镜下（40或100倍）扫描整张切片，人工选择血管丰富的热点区域（hot-spots），在200倍放大视野下记数3个血管最为丰富的热点区域，然后取平均值代表该肿瘤组织的血管形成状况。

　对该方法的评价：

　1．）对热点的选择需要必要的训练

　2．）在肉瘤组织中无明确的热点。　

该方法仍需改进的方面

1．）在国际合作研究时进行质量控制的困难：参考切片的分布不同

2．）应开发可广泛使用及快速自动化的热点选择方法：这种热点选择方法在大规模的疾病预后或预测研究中可以和人工选择血管丰富的热点区域的准确度相媲美。

3．）在大规模的疾病预后或预测研究中需要考虑纤维组织是否存在以及其大小、组成。

4．）在肿瘤组织中估计chalkley点重叠形态测定法评分非常低的有活力肿瘤细胞存在面积的大小是否能作为肿瘤组织非血管依赖性生长的预测指标。

 

2　内皮细胞增值比例

　计量单位：百分比

  方法学：用抗CD34或抗CD31和抗Ki67对肿瘤切片作免疫组织化学双标记，然后随机选择视野计数。

　对该方法的评价：该方法可作为预测个体对抗血管生成药物治疗反应及监测这些药物反应的监测指标。在这方面和肿瘤细胞的生长方式有较好可比性。

  该方法仍需改进的方面：

1．）在建立稳定的使用抗单链ＤＮＡ抗体的双标记技术之后，应该和内皮细胞凋亡指数一起检测。

2．）是否在活检组织中对内皮细胞增殖和凋亡比例的估计能代表整个肿瘤组织？　

 

3 毛细血管外膜细胞（pericytes）覆盖指数

计量单位：百分比

  方法学：用抗CD34或抗CD3１和抗SMA （alpha-smooth muscle actin）对肿瘤切片作免疫组织化学双标记，然后随机选择视野计数。

 

对该方法的评价:

1．）该方法可作为预测个体对抗血管生成药物治疗反应及监测这些药物反应的监测指标。在这方面和肿瘤细胞的生长方式有较好可比性。

2．）可以用于与邻近正常组织毛细血管外膜细胞覆盖指数的相关性评价。

 

在显微镜视野下记数肿瘤组织切片的微血管数目可以估计肿瘤组织在某时点的血管生成或血管退缩的大致结果。之所以要首先在低倍镜下选择所谓的“热点”区域或某个给研究者其包含有丰富微血管印象的区域，是因为这样的“热点”区域起源于肿瘤细胞克隆，伴有非常高的血管生成潜能，易于获得血液供应，因此其产生转移的能力增强，并且转移灶具有血管生成及生长的能力。顾名思义，毛细血管外膜细胞是一种紧贴于毛细血管壁外面的一种细胞，它是一种间充质样细胞，细长，具有收缩性。它的分化程度较低，在不同的细胞因子的作用下可以进一步分化为纤维母细胞、巨噬细胞、或者平滑肌细胞。在一些肿瘤组织中,毛细血管外膜细胞和血管平滑肌细胞都参与了肿瘤血管的形成，这是易于理解的，因为完整的血管壁必定包含了这些成分。另外，毛细血管外膜细胞还可以通过分泌基质金属蛋白酶－9（matrix metalloprotease-9, MMP-9）促进肿瘤组织血管的生成。因此，检测肿瘤组织中微血管毛细血管外膜细胞的覆盖指数可以从一个侧面反映肿瘤血管的生成状况。

 REFERENCE:  P.B. Vermeulen, G. Gasparini, S.B.Fox, et al ,2002 .