从道格拉斯“口交患喉癌”说起（7）：怎样才知道有没有感染HPV？

北京地坛医院皮肤性病科  伦文辉 吴焱

 

 

hpv还不能进行体外病毒培养，组织切片或细胞涂片后染色镜检方法的灵敏度也比较低，而临床常用于其他病原体检测的血清学方法对于诊断hpv感染来说结果也并不可靠。目前临床上直接或间接检测hpv的手段主要包括以下几个方面：一是组织活检，通过细胞的形态学改变来判断。典型的改变是表皮细胞核周空泡等。也可以进一步进行免疫组化检测，准确性较高，但由于是有创伤的操作，取材麻烦，实际应用相对不多。二是液基细胞学检测（tct），tct在一定程度上也可以检测hpv感染的存在，不过与分子生物学检测的方法比较，敏感性较差。三是依赖于分子生物学技术手段对hpv dna进行检测，包括核酸杂交和pcr方法等，根据具体的方法，可以对hpv进行定量检测和分型检测。这些方法包括传统杂交法、杂交捕获法、pcr法等。下面简单介绍一下分子生物学方法。北京地坛医院皮肤性病科吴焱

一、传统杂交法

特异度高、直观等优点，但操作复杂，灵敏度较pcr法低，而且需要新鲜组织样本，不便于临床推广。

二、杂交捕获法

由美国digene公司生产的第二代杂交捕获法hybrid capture?systems(hc2)是一种液相杂交法，是目前唯一被美国食品药品监督管理局批准的hpv dna检测技术，它能同时检测出13种高危型型病毒(hpvl6、18、3l、33、35、39、45、5l、52、56、58、59、68)和5种低危型病毒(6、ll、42、43、44)。虽然美国cdc批准了hc2检测低危型，但目前国内的试剂只能检测高危型。hc2高危型检测灵敏度较好、重复性高，但其缺点在于不能确定具体hpv亚型，且检测成本昂贵，在经济欠发达地区很难推广。另外，hc2还存在一定的交叉杂交的问题，有时会引起假阳性结果。

hc2检测是目前临床高危型hpv检测领域很重要，很常用的方法，也是宫颈癌筛查的首选方法。hc2统一的临床判定标准≥1.0pg/ml（相当于5000病毒拷贝/次）。需要特别指出，hc2  hpv dna检测结果阴性并不代表完全没有感染hpv，只是代表其体内hpv含量低于5000拷贝/次。病毒含量低于该水平，则在至少3-5年内发生宫颈上皮瘤变cin 2/3级病变的可能性是非常低的。也就是说，罹患宫颈癌的风险是非常低的。若检测结果为阳性， hc2 hpv dna≥  1.0pg/ml(5000copies/ml)，则应当每年定期进行hc2复查，若连续两年检测结果阳性，应咨询医生进行下一步检查或治疗，年龄大于30岁女性更应密切监测。宫颈癌手术后的病人监测hc2可预测病变恶化或手术后复发的风险。

三、pcr法

以pcr为基础的检测方法是目前认为较好的hpv dna检测及分型方法，主要分为基因扩增和产物分析两部分。它能用于hpv定性及半定量检测、dna测序和基因突变分析。

1．pcr基因扩增

包括通用引物pcr(gp-pcr)、型特异性pcr(ts-pcr)和实时荧光定量pcr(rq-pcr)等方法。

2．pcr产物分析

包括基因芯片（也称dna芯片）法、限制性片段长度多态性分析(rflp)、测序法和杂交分析法等。基因芯片法可进行hpv分型及诊断混合感染，且具有通量大、高敏感性和特异性的特点，可用于大范围筛查，更适于流行病学的调查和疫苗方面的研究。

男性检测hpv也是有重要意义的，研究显示有多个性伴侣的男性是高危型和低危型hpv的“运载工具”。男性感染高危型hpv主要是亚临床感染。以往检测男性hpv感染是通过阴茎灌洗液或精液检测hpv dna，但存在取材的困难、检测手段的敏感性低、实验程序复杂，缺乏正常对照等缺点。

目前临床上对于hpv的检测还没有既能分型又能定量，既非常准确又价格便宜的方法，为了解决这个问题，一是根据不同的目的进行不同的检测，一是倾向于联合应用，例如，液基细胞学检测（tct）联合细胞hc2检测、或者基因芯片进行筛查后，进行hc2半定量检测等。另外，性伴同时进行检测，无论对hpv低危型引起的尖锐湿疣，还是hpv高危型引起的宫颈癌等疾病，都有重要意义。