肺部真菌感染病原学检测的方法

　　肺部真菌感染的患者临床表现多样，影像学特征不典型，实验室病原学检查就成为诊断的重要依据，其中临床体液标本的涂片镜检和真菌培养应用最为广泛，该方法虽然在某些真菌感染的诊断中尚难以鉴别是定植还是感染，但其结果作为“微生物学证据”，无疑对于侵袭性真菌病的诊断和治疗都有重要的参考价值。临床上常用的检查病原体的手段主要以下几种。

　　1、合格痰标本的获取和处理
　　痰是呼吸道感染病原学诊断最重要最常用的临床标本，而痰标本采集方法的正确与否、痰标本是否合格同样是真菌培养能否检出病原菌的关键。与细菌培养一样，真菌痰标本也应在临床怀疑肺真菌病及使用抗真菌药物之前采集，必要时应多次收集，并在2小时内送检，如不能及时送检应置于4℃保存，并在24小时内处理。目前临床送检痰标本的合格率仅在40％～60％。正确的方法采集方法是，嘱患者先行漱口，深咳嗽，然后留取脓性痰或分泌物送检。无痰病人如需检查肺孢子菌，可用高渗盐水雾化吸入诱导痰液。

　　2、气道分泌物行镜检和培养
　　气管插管和气管切开患者，经人工气道吸引气道分泌物行镜检和培养是呼吸道感染病原学诊断的重要依据，可靠性高于痰标本。文献显示其病原学检测有很高的敏感度和特异度[2]。气管吸引术多采用盲吸法。在操作前应尽可能改善患者全身状况，充分给氧，如为呼吸机支持患者，可短暂给予纯氧吸入，防止操作过程中造成低氧血症。全部操作需遵循无菌原则，使用无菌吸痰管和痰液收集器，吸引前将负压调整至150～200mmHg（成人），操作应轻柔、敏捷，间断抽吸。标本处理基本同痰标本。

　　3、经支气管镜引导保护性毛刷（PSB）技术
　　相对于痰培养检查，经支气管镜引导保护性毛刷（PSB）技术或盲取法保护性毛刷（BPSB）均可减少标本污染，有更好的准确性和可重复性[4，5]。经口或鼻插入者按支气管镜常规检查操作，在插入支气管镜过程中尽可能不作吸引分泌物操作。在经人工气道插入支气管镜采样前，需提前充分给氧，呼吸机支持患者亦可使用三通管，在采样过程之中维持呼吸机使用。将支气管镜引导至影像学定位的病变部位后（宜选择浸润病灶最明显或有脓性分泌物的区域），依次推出套管及毛刷，刷取病变部位分泌物后，将毛刷退入套管后拔出套管。用75％医用乙醇擦拭消毒套管外壁和尖端后，将毛刷伸出，浸入含有1ml无菌生理盐水试管中，充分振荡后，无菌密封试管送培养。

　　4、血培养检测病原菌
　　血培养检测病原菌是侵袭性真菌病诊断中的重要依据之一。其操作与常规细菌培养血标本采集相同，要注意无菌原则，在应用抗真菌药物前采血更佳，应采取不同部位的双份血进行培养；如果有留置血管内导管，至少应包括经导管采集的血标本；同时拔除导管者，应将导管尖同步送培养。

　　5、胸腔积液检测
　　36％侵袭性真菌病患者可能出现胸腔积液[6]，但胸水培养阳性患者并不多见，作为无菌腔液，其阳性有确诊价值。胸水标本需离心后取沉淀直接涂片镜检或接种培养。